Desenvolvimento de tecnicas moleculares para o diagnostico diferencial do virus da bronquite infecciosa e do pneumovirus aviario

Orientador: Clarice Weis Arns

Access type:openAccess
Publication Date:2004
Main Author: D'Arce, Regina Celia Freitas
Advisor: Arns, Clarice Weis, 1956-
Referee: Gatti, Maria Silvia Viccari, Roeche, Paulo Michel, Jerez, Jose Antonio, Madeira, Alda Maria Backx Noronha, Araujo, Jo?o Pessoa, Brocchi, Marcelo
Document type: Doctoral thesis
Published: [s.n.]
Universidade Estadual de Campinas. Instituto de Biologia
Portuguese subjects:
Online Access:http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/316622
Citation:D'ARCE, Regina Celia Freitas. Desenvolvimento de tecnicas moleculares para o diagnostico diferencial do virus da bronquite infecciosa e do pneumovirus aviario. 2004. 68p. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Dispon?vel em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/316622>. Acesso em: 4 ago. 2018.
Portuguese abstract:Resumo: O presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento de t?cnicas moleculares diferenciais para o diagn?stico do V?rus da Bronquite Infecciosa (VBI), respons?vel por infec??es respirat?ria e urogenital agudas, altamente contagiosas em frangos e galinhas, e do Pneumov?rus Avi?rio (PVA), agente etiol?gico da Rinotraque?te dos Perus e associado ? S?ndrome da Cabe?a Inchada (SCI) em galinhas. Sorotipos do VBI e subtipos do PV A foram cultivados em ovos embrionados e em c?lulas CER (Chicken Embryo Related), respectivamente. Foram adaptadas as t?cnicas de extra??o do RNA viral, RT -PCR, nested-PCR subtipo-especmco. para o PVA e RT -PCR-RFLP para o VBI a partir dos v?rus cultivados, sendo testadas posteriormente em material coletado de aves infectadas experimentalmente. Tanto o PVA como o VBI foram detectados por RT-PCR e/ou nested-PCR nos grupos infectados com os agentes isoladamente ou em co-infec??o, principalmente nos dias 3 e 6 p?s-inocula??o. As t?cnicas diagn?sticas desenvolvidas foram ent?o utilizadas na detec??o viral de materiais cl?nicos, obtidos de plant?is av?colas com hist?rico de problemas respirat?rios e sorologia positiva para os agentes estudados. Para o PVA obteve-se a detec??o de oito v?rus de campo, todos pertencentes ao subtipo A, donde foi poss?vel o isolamento de quatro amostras. No caso do VBI foram detectadas tr?s amostras de campo, todos diferenciados da amostra vacinal por RFLP, dos quais isolou-se duas amostras em ovos embrionados. Amostras positivas tiveram seus fragmentos de PCR seq?enciados, confirmando a classifica??o obtida atrav?s da nested-PCR para o PVA e do RFLP para o VBI. A an?lise das seq??ncias do VBI mostrou que os isolados de campo diferem de todos os sorotipos descritos at? o momento. As t?cnicas molecu1ares otimizadas nesse estudo confinaram sua capacidade em diferenciar os subtipos A e B do PV A, bem como as variantes detectadas de VBI de campo e o sorotipo vacinal, demonstrando ser adequadas alternativas diagn?sticas e valiosas ferramentas para estudos de epidemiologia molecular
English abstract:Abstract: The aim of this study was the development of molecu1ar techniques able to differentiate Infectious Bronchitis Virus (IBV), responsible for high 'contagious acute respiratory and renal infections in chickens, and Avian Pneumovirus (APV), causal agent of Turkey Rhinotracheitis and associated to Swollen head Syndrome (SHS) in chickens. APV and IBV strains, representatives of subtypes A and B and serotype Massachussets, were multiplied in Chicken Embryo Related (CER) cell line and embrionated eggs, respectively. The techniques of RNA extraction, RT -PCR, APV subtype-specific nested-PCR and RT -PCR-RFLP for IBV diagnosis were adapted, and then tested in experimentally infected chickens. Both viruses were detected by RT -PCR and/or nested-PCR in the groups infected with the agents separately or in co-infection, mainly at 3rd end 6th day post infection. Moreover, these techniques were utilised in clinical field samples from chicken and turkey flocks with respiratory problems and positive APV and IBV serology. Eight APV were detected, all of them classified as subtype A, where four samples were isolated. In the case of IBV, three field samples were detected, originating two viral isolation, all different from vaccine serotype by RFLP. The PCR products were sequenced, confirming the APV nested-PCR and IBV RFLP classification. IBV sequence analysis showed that the Brazilian field samples detected in this study are distinct from all serotype described 50 far. These optimised techniques could be useful to direct differentiation of APV subtypes A and B, and IBV field and vaccine strains, proving to be a valuable molecular epidemiological tool