Expressão transitória da glicoproteína S1 recombinante do vírus da bronquite infecciosa em células de mamíferos
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Data de Publicação: | 2014 |
Tipo de documento: | Dissertação |
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Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPel - Guaiaca |
Texto Completo: | http://guaiaca.ufpel.edu.br/handle/prefix/4798 |
Resumo: | A infecção pelo vírus da bronquite infecciosa (IBV) tem sido causa de importantes perdas econômicas na avicultura mundial. O IBV possui diversos genótipos e sorotipos que diferem amplamente em sua patogenicidade, e destes, algumas cepas possuem distribuição mundial. Dentre as proteínas que compõem o IBV a glicoproteína S (subdividida em S1 e S2) destaca-se por ser altamente glicosilada. A subunidade S1 é a principal indutora de anticorpos neutralizantes e resposta imune protetora, além de ser responsável pela adsorção do vírus aos receptores das células hospedeiras, por determinar o sorotipo de IBV, e por ser um dos principais determinantes do tropismo celular. Devido à complexidade dos processos que ocorrem durante a síntese da glicoproteína S1, o sistema de expressão em células de mamíferos é o que detém características, como as modificações pós-traducionais incluindo glicosilação, que o torna indicado para a síntese desta proteína. O presente estudo teve como objetivo clonar e expressar de forma transitória o gene sintético da glicoproteína do S1 do IBV elaborado a partir do consenso das sequências de amostras de campo brasileiras e internacionais, em células HEK 293 (Human embrionary kidney) e HeLa (Human cervical cancer). O gene foi clonado no vetor de expressão em células de mamíferos e transfectado nos cultivos celulares. Após 96 horas foi coletado o sobrenadante das células e o lisado celular. A expressão e purificação da glicoproteína S1 recombinante (rS1-IBV) foram verificadas a partir da técnica de SDS-PAGE e posteriormente caracterizada através do Western blotting utilizando soro hiperimune anti-IBV. Houve a detecção da rS1- IBV a partir do sobrenadante das células. Não houve detecção da proteína recombinante a partir do lisado celular de ambas as células. O estudo demonstrou que é possível expressar a glicoproteína S1 recombinante em células de mamíferos. |
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2019-10-15T20:23:18Z2019-10-15T20:23:18Z2014-02-24MUNHOZ, Lívia Silveira. Expressão transitória da glicoproteína S1 recombinante do vírus da bronquite infecciosa em células de mamíferos. 2014. 40f. Dissertação (Mestrado) – Programa de Pós-Graduação em Veterinária. Universidade Federal de Pelotas, Pelotas.http://guaiaca.ufpel.edu.br/handle/prefix/4798A infecção pelo vírus da bronquite infecciosa (IBV) tem sido causa de importantes perdas econômicas na avicultura mundial. O IBV possui diversos genótipos e sorotipos que diferem amplamente em sua patogenicidade, e destes, algumas cepas possuem distribuição mundial. Dentre as proteínas que compõem o IBV a glicoproteína S (subdividida em S1 e S2) destaca-se por ser altamente glicosilada. A subunidade S1 é a principal indutora de anticorpos neutralizantes e resposta imune protetora, além de ser responsável pela adsorção do vírus aos receptores das células hospedeiras, por determinar o sorotipo de IBV, e por ser um dos principais determinantes do tropismo celular. Devido à complexidade dos processos que ocorrem durante a síntese da glicoproteína S1, o sistema de expressão em células de mamíferos é o que detém características, como as modificações pós-traducionais incluindo glicosilação, que o torna indicado para a síntese desta proteína. O presente estudo teve como objetivo clonar e expressar de forma transitória o gene sintético da glicoproteína do S1 do IBV elaborado a partir do consenso das sequências de amostras de campo brasileiras e internacionais, em células HEK 293 (Human embrionary kidney) e HeLa (Human cervical cancer). O gene foi clonado no vetor de expressão em células de mamíferos e transfectado nos cultivos celulares. 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The S1 subunit is the major inducer of neutralizing antibodies and protective immune response. It’s responsible for adsorption of the virus to receptors on host cells, to determine the serotype of IBV, and for being a major determinant of cell tropism. Due to the complexity of the processes that occurs during the synthesis of the glycoprotein S1, the expression system in mammalian cell has characteristics such as post-translational modifications, like glycosylation, which makes it more attractive for the synthesis of this protein. The present study aimed to clone and express transiently the synthetic gene S1 glycoprotein of IBV produced from consensus sequences of brazilian and international samples. It had been used HEK 293 (Human embrionary kidney) and HeLa (Human cervical cancer). The gene was cloned into mammalian expression vector and transfected in cell culture. After 96 hours the supernatant cell and the lysed cell were collected. Expression and purification of recombinant S1 glycoprotein (rS1-IBV) were verified using the technique of SDS-PAGE and subsequently characterized by Western blotting using hyperimmune serum anti-IBV. It had been detected rS1-IBV from the cell supernatant. There was no detection of the recombinant protein from cell lysed of both cell. The study proved that it is possible to express recombinant S1 glycoprotein in mammalian cells.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESporUniversidade Federal de PelotasPrograma de Pós-Graduação em VeterináriaUFPelBrasilFaculdade de VeterináriaCNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIAVeterináriaAviculturaBronquite infecciosa (IBV)Expressão transitóriaGlicoproteína S1Transient expressionS1 glycoproteinExpressão transitória da glicoproteína S1 recombinante do vírus da bronquite infecciosa em células de mamíferosinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesishttp://lattes.cnpq.br/8892119847452527http://lattes.cnpq.br/8105578106258354Esteves, Paulo Augustohttp://lattes.cnpq.br/2053236395162795Hübner, Silvia de OliveiraMunhoz, Lívia Silveirainfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFPel - Guaiacainstname:Universidade Federal de Pelotas (UFPEL)instacron:UFPELTEXTdissertacao_livia_silveira_munhoz.pdf.txtdissertacao_livia_silveira_munhoz.pdf.txtExtracted texttext/plain95883http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/bitstream/prefix/4798/6/dissertacao_livia_silveira_munhoz.pdf.txt22c94e02081990ee8216d27eaffb1e45MD56open accessTHUMBNAILdissertacao_livia_silveira_munhoz.pdf.jpgdissertacao_livia_silveira_munhoz.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1390http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/bitstream/prefix/4798/7/dissertacao_livia_silveira_munhoz.pdf.jpg3dfcda35fce3a6557c5735da92aa8c96MD57open accessORIGINALdissertacao_livia_silveira_munhoz.pdfdissertacao_livia_silveira_munhoz.pdfapplication/pdf561883http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/bitstream/prefix/4798/1/dissertacao_livia_silveira_munhoz.pdfe4910530817c0fb8b191232a8a58d6f2MD51open accessCC-LICENSElicense_urllicense_urltext/plain; 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