Expressão transitória da glicoproteína S1 recombinante do vírus da bronquite infecciosa em células de mamíferos

• Autor(a) principal: Munhoz, Lívia Silveira
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFPel - Guaiaca
• Texto Completo: http://guaiaca.ufpel.edu.br/handle/prefix/4798
• topic: CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA; Veterinária; Avicultura; Bronquite infecciosa (IBV); Expressão transitória; Glicoproteína S1; Transient expression; S1 glycoprotein

A infecção pelo vírus da bronquite infecciosa (IBV) tem sido causa de importantes perdas econômicas na avicultura mundial. O IBV possui diversos genótipos e sorotipos que diferem amplamente em sua patogenicidade, e destes, algumas cepas possuem distribuição mundial. Dentre as proteínas que compõem o IBV a glicoproteína S (subdividida em S1 e S2) destaca-se por ser altamente glicosilada. A subunidade S1 é a principal indutora de anticorpos neutralizantes e resposta imune protetora, além de ser responsável pela adsorção do vírus aos receptores das células hospedeiras, por determinar o sorotipo de IBV, e por ser um dos principais determinantes do tropismo celular. Devido à complexidade dos processos que ocorrem durante a síntese da glicoproteína S1, o sistema de expressão em células de mamíferos é o que detém características, como as modificações pós-traducionais incluindo glicosilação, que o torna indicado para a síntese desta proteína. O presente estudo teve como objetivo clonar e expressar de forma transitória o gene sintético da glicoproteína do S1 do IBV elaborado a partir do consenso das sequências de amostras de campo brasileiras e internacionais, em células HEK 293 (Human embrionary kidney) e HeLa (Human cervical cancer). O gene foi clonado no vetor de expressão em células de mamíferos e transfectado nos cultivos celulares. Após 96 horas foi coletado o sobrenadante das células e o lisado celular. A expressão e purificação da glicoproteína S1 recombinante (rS1-IBV) foram verificadas a partir da técnica de SDS-PAGE e posteriormente caracterizada através do Western blotting utilizando soro hiperimune anti-IBV. Houve a detecção da rS1- IBV a partir do sobrenadante das células. Não houve detecção da proteína recombinante a partir do lisado celular de ambas as células. O estudo demonstrou que é possível expressar a glicoproteína S1 recombinante em células de mamíferos.