Desenvolvimento de um RT-PCR RFLP para a detec??o e diferencia??o molecular das variantes vacinais e brasileiras do v?rus da Bronquite Infecciosa das Galinhas

The avian infectious bronchitis (AIB) is a disease caused by a single-stranded RNA virus pertaining to the coronaviridae family of the Gammacoronavirus genera. AIB is a disease of great economic significance to aviculture worldwide, not only because of the injury it causes to the breeders, but also...

Full description

Access type:openAccess
Publication Date:2017
Main Author: SANTOS, D?bora Martins dos lattes
Advisor: Santos, Huarrisson Azevedo
Co-advisor: Lima, Marcos F?bio de
Referee: Santos, Huarrisson Azevedo, Guedes Junior, Daniel da Silva, Souza, Paulo Cesar Augusto de
Document type: Doctoral thesis
Language:por
Published: Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro
Program: Programa de P?s-Gradua??o em Ci?ncias Veterin?rias
Department: Instituto de Veterin?ria
Portuguese subjects:
English subjects:
IVB
Knowledgement areas:
Online Access:https://tede.ufrrj.br/jspui/handle/jspui/2602
Citation:SANTOS, D?bora Martins dos. Desenvolvimento de um RT-PCR RFLP para a detec??o e diferencia??o molecular das variantes vacinais e brasileiras do v?rus da Bronquite Infecciosa das Galinhas. 22017. 67 f. Disserta??o (Mestrado em Ci?ncias Veterin?rias). Instituto de Veterin?ria, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Serop?dica, RJ, 2017.
Portuguese abstract:A Bronquite Infecciosa das Galinhas (BIG) ? uma doen?a causada por um v?rus RNA de fita simples pertencente ? Fam?lia Coronavidae, do g?nero Gammacoronavirus. A BIG ? uma doen?a de alta import?ncia econ?mica para a avicultura mundial, n?o s? por causar preju?zos aos plant?is acometidos pela doen?a, como tamb?m, por ser diagn?stico diferencial de diversas patologias importantes na sanidade av?cola. O objetivo da presente pesquisa foi desenvolver uma t?cnica de RT-PCR RFLP capaz de detectar e discriminar com seguran?a as cepas do vBIG do sorotipo Massachusetts e BR a partir de tecidos da traqueia, rim e intestino em granjas de frango de corte e postura, no Estado do Rio de Janeiro. Neste estudo, foram coletadas 117 amostras de intestino, rim e/ou traqueia de um total de 50 aves provenientes de quatro granjas (tr?s granjas de corte e uma granja de postura), no estado do Rio de Janeiro. O RNA total foi extra?do de todas as amostras e submetidos a uma rea??o de transcri??o reversa, para realizar a s?ntese do cDNA. As amostras de cDNA foram submetidas ? t?cnica de RT-qPCR. Desta maneira, constatou-se que 92% das aves (n = 46/50) foram positivas em pelo menos um dos ?rg?os para o v?rus da bronquite das galinhas (vBIG). A t?cnica de RT-PCR RFLP desenvolvido por esse trabalho foi capaz de detectar uma frequ?ncia de 94,64% (n = 53/56) das amostras pertencentes ao sorotipo BR-I, 3,57% (n = 2/56) das amostras apresentaram fragmentos com padr?o semelhante ao esperado do sorotipo Massachusetts e 1,78% (1/56) apresentou padr?o para ambos os sorotipos (Massachusetts e BR). N?o houve diferen?a significativa entre a frequ?ncia da detec??o molecular do vBIG nos tecidos da traqueia, rim e intestino de frangos de corte e galinhas de postura de granjas no estado do Rio de Janeiro. A t?cnica de RT-PCR RFLP foi capaz de detectar e difere.nciar com seguran?a os sorotipos Massachusetts e BR. A alta frequ?ncia do sorotipo BR demonstra que apesar de vacinadas, as aves desenvolveram a doen?a, sugerindo, que um novo protocolo vacinal deva ser abordado, j? que a maioria das cepas encontradas pertence a um sorotipo geneticamente distinto.
English abstract:The avian infectious bronchitis (AIB) is a disease caused by a single-stranded RNA virus pertaining to the coronaviridae family of the Gammacoronavirus genera. AIB is a disease of great economic significance to aviculture worldwide, not only because of the injury it causes to the breeders, but also because it is a differential diagnosis for several important pathologies that may affect poultry. The goals of the present research were to develop a RT-PCR RFLP technique capable of safely detecting and discriminating the strains of the IBV of the Massachusetts and BR serotypes from the trachea, kidney and intestines tissues in poultry farms of broilers and layers in the estate of Rio de Janeiro. In this study, 117 samples of intestines, kidneys and/or tracheae were collected from a total of 50 birds originating from 4 farms (three broiler farms and one layer farm) in the estate of Rio de Janeiro. The total RNA was extracted from all the samples and subjected to a reverse transcription process for the cDNA synthesis. The cDNA samples were subjected to the RT-qPCR technique. It was found that 92% of the birds (n= 46/50) were positive in at least one of the organs for the chicken bronchitis virus (vBIG). The RT-PCR RFLP technique developed in this work was able to detect a frequency of 94,64% (n= 53/56) of the samples belonging to the BR-I serotype, 3,7% (n= 2/56) of the samples showed fragments with patterns similar to what is expected from the Massachusetts Serotype and 1,78% (n= 1/56) showed patterns from both serotypes (Massachusetts and BR). There was no significant difference in the frequency of molecular detection of vBIG in the tissues of the trachea, kidney and intestines of the broiler and layer poultries from farms in the estate of Rio de Janeiro. The RT-PCR RFLP technique was able to safely detect and distinguish the Massachusetts and BR serotypes. The high frequency of the BR serotype demonstrates that, although vaccinated, the birds developed the disease, indicating that a new vaccine protocol must be addressed, since the majority of the strains found belong to a genetically distinct serotype.