Expressão heteróloga da proteína não-estrutural 1 (NS1) do Zika virus em Pichia pastoris

• Autor(a) principal: Dias, Ingrid Marques
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
• Texto Completo: http://www.locus.ufv.br/handle/123456789/22588
• topic: Vírus da Zika; Flavivírus; Proteínas; Leveduras; Virologia; Virologia

O Zika virus (ZIKV) foi identificado pela primeira vez em macacos Rhesus na Uganda, em 1947. Nas Américas foram confirmados, entre 2015 e 2017, 223.336 casos de infecção pelo ZIKV. Em 1o de fevereiro de 2016, a pandemia do ZIKV foi declarada uma Emergência em Saúde Pública de Preocupação Internacional. O ZIKV contém um genoma de RNA que dá origem a uma poliproteína clivada em três proteínas estruturais (PrM/M, E e C) e sete proteínas não-estruturais (NS1, NS2a, NS2b, NS3, NS4a, NS4b e NS5). A proteína NS1 de flavivírus é uma glicoproteína altamente conservada cujo peso molecular varia de 46 a 55 kDa a depender da extensão de sua glicosilação. A mesma participa do ciclo replicativo viral e realiza funções imunomoduladoras interagindo com proteínas do sistema complemento e desencadeando altas concentrações de Imunoglobulina G (IgG) durante infecções primárias e secundárias. Sendo assim, desempenha papel crucial na resposta imune do hospedeiro, e tem sido utilizada em diversos estudos como marcador diagnóstico precoce para detecção de infecções por flavivírus. Portanto, este trabalho objetivou expressar de maneira heteróloga a proteína não-estrutural 1 (NS1) do ZIKV em Pichia pastoris, com fins diagnósticos. Para a transformação das leveduras P. pastoris KM71H foi utilizado um plasmídeo recombinante, o pPICZαA_NS1ZIKV. As leveduras transformadas por eletroporação foram crescidas em meio adequado para a indução da expressão proteica. Como resultado obteve-se que o gene otimizado da proteína NS1 foi integrado ao vetor de expressão pPICZαA, produzindo o plasmídeo recombinante pPICZαA_NS1ZIKV que foi introduzido na levedura Pichia pastoris KM71H. A expressão da proteína NS1 pela levedura foi confirmada por meio de Western Blot, o que nos permite concluir que a transformação com o vetor pPICZαA_NS1ZIKV ocorreu de maneira satisfatória. Portanto, os resultados deste trabalho nos mostram a eficiência do sistema de expressão heteróloga da proteína NS1 do ZIKV em Pichia pastoris e como a engenharia genética pode ser empregada para beneficiar diversos ramos da ciência.