Diagnóstico sorológico de erliquiose canina com antígeno brasileiro de Ehrlichia canis
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Publication Date: | 2007 |
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Source: | Repositório Institucional da UNESP |
Download full: | http://dx.doi.org/10.1590/S0103-84782007000300030 http://hdl.handle.net/11449/29368 |
Summary: | O presente trabalho relata o isolamento de Ehrlichia canis em cultivo de células DH82 e posterior padronização da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Leucócitos de uma cadela experimentalmente infectada com o isolado Jaboticabal de E. canis foram inoculados em cultivo de células DH82. A inoculação foi monitorada após a segunda semana, a cada 5-6 dias, através de exames citológicos e pela amplificação de um fragmento do gene dsb de Ehrlichia pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) para confirmação da infecção. A cultura apresentou-se positiva aos 27 dias pós-inoculação pela PCR e aos 28 dias pela citologia. No 33o dia pós-inoculação, observou-se 20% de células infectadas e, aos 53 dias, 60% de infecção. Atualmente, o isolado encontra-se estabelecido em células DH82, com várias passagens atingindo 90-100% de células infectadas entre 7-10 dias após a inoculação. Após o seqüenciamento do produto de PCR, o isolado apresentou-se 100% similar à seqüência correspondente de E. canis depositada no GenBank. As células infectadas foram utilizadas como antígeno para a padronização da RIFI para detecção da infecção em cães. |
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Diagnóstico sorológico de erliquiose canina com antígeno brasileiro de Ehrlichia canisSerological diagnosis of canine monocytic ehrlichiosis with Brazilian antigen of Ehrlichia canisEhrlichia canisIsolationDH82ImmunofluorescenceSerologyEhrlichia canisIsolamentoDH82ImunofluorescênciaSorologiaO presente trabalho relata o isolamento de Ehrlichia canis em cultivo de células DH82 e posterior padronização da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Leucócitos de uma cadela experimentalmente infectada com o isolado Jaboticabal de E. canis foram inoculados em cultivo de células DH82. A inoculação foi monitorada após a segunda semana, a cada 5-6 dias, através de exames citológicos e pela amplificação de um fragmento do gene dsb de Ehrlichia pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) para confirmação da infecção. A cultura apresentou-se positiva aos 27 dias pós-inoculação pela PCR e aos 28 dias pela citologia. No 33o dia pós-inoculação, observou-se 20% de células infectadas e, aos 53 dias, 60% de infecção. Atualmente, o isolado encontra-se estabelecido em células DH82, com várias passagens atingindo 90-100% de células infectadas entre 7-10 dias após a inoculação. Após o seqüenciamento do produto de PCR, o isolado apresentou-se 100% similar à seqüência correspondente de E. canis depositada no GenBank. As células infectadas foram utilizadas como antígeno para a padronização da RIFI para detecção da infecção em cães.The present study describes a successful isolation of Ehrlichia canis and its establishment in DH82 cells, followed by the development of an Indirect Fluorescent Antibodies Test (IFAT). Leukocytes collected from an experimentally infected dog with the Jaboticabal strain of E. canis were used to inoculate a DH82 cell monolayer. Two weeks later, the inoculated culture was checked for infectivity, every 5-6 days by both cytological staining and PCR, targeting a fragment of the dsb gene. The cell culture showed to be infected by Ehrlichia on day 27 by PCR and on day 28 by cytological staining. By the day 33, the infection rate reached 20% and on day 53, 60%. Currently, the isolate is established in DH82 cells, with several passages reaching 90-100% of infected cells, within 7 to 10 days post inoculation. After sequencing, the amplicon was identical to other E. canis corresponding sequences available in the GenBank. DH82 infected cells were used to standardize an IFAT for the diagnosis of canine ehrlichiosis.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)Agência Paulista de Tecnologia dos Agronegócios Pólo Regional da Alta SorocabanaUniversidade de São Paulo Departamento de Clínica VeterináriaUniversidade Estadual Paulista Departamento de Patologia VeterináriaUniversidade de São Paulo Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde AnimalUniversidade Estadual Paulista Departamento de Patologia VeterináriaUniversidade Federal de Santa Maria (UFSM)Agência Paulista de Tecnologia dos Agronegócios (APTA)Universidade de São Paulo (USP)Universidade Estadual Paulista (Unesp)Aguiar, Daniel MouraSaito, Taís BerelliHagiwara, Mitika KuribayashiMachado, Rosângela Zacarias [UNESP]Labruna, Marcelo Bahia2014-05-20T15:14:52Z2014-05-20T15:14:52Z2007-06-01info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/article796-802application/pdfhttp://dx.doi.org/10.1590/S0103-84782007000300030Ciência Rural. Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), v. 37, n. 3, p. 796-802, 2007.0103-8478http://hdl.handle.net/11449/2936810.1590/S0103-84782007000300030S0103-84782007000300030S0103-84782007000300030.pdf3254990612451836SciELOreponame:Repositório Institucional da UNESPinstname:Universidade Estadual Paulista (UNESP)instacron:UNESPporCiência Rural0.5250,337info:eu-repo/semantics/openAccess2023-11-30T06:18:55Zoai:repositorio.unesp.br:11449/29368Repositório InstitucionalPUBhttp://repositorio.unesp.br/oai/requestopendoar:29462023-11-30T06:18:55Repositório Institucional da UNESP - Universidade Estadual Paulista (UNESP)false |
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O presente trabalho relata o isolamento de Ehrlichia canis em cultivo de células DH82 e posterior padronização da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Leucócitos de uma cadela experimentalmente infectada com o isolado Jaboticabal de E. canis foram inoculados em cultivo de células DH82. A inoculação foi monitorada após a segunda semana, a cada 5-6 dias, através de exames citológicos e pela amplificação de um fragmento do gene dsb de Ehrlichia pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) para confirmação da infecção. A cultura apresentou-se positiva aos 27 dias pós-inoculação pela PCR e aos 28 dias pela citologia. No 33o dia pós-inoculação, observou-se 20% de células infectadas e, aos 53 dias, 60% de infecção. Atualmente, o isolado encontra-se estabelecido em células DH82, com várias passagens atingindo 90-100% de células infectadas entre 7-10 dias após a inoculação. Após o seqüenciamento do produto de PCR, o isolado apresentou-se 100% similar à seqüência correspondente de E. canis depositada no GenBank. As células infectadas foram utilizadas como antígeno para a padronização da RIFI para detecção da infecção em cães. |
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