Análise do transcritoma do Trypanosoma cruzi e da célula hospedeira durante o processo de infecção

• Autor(a) principal: Lopes, Ana Luisa Kalb
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/23855
• topic: Trypanosoma cruzi; Trypanosoma rangeli; Chagas Disease; Gene Expression; Immunomodulation; Parasitolology; Doença de Chagas; Expressão Gênica; Imunomodulação; Parasitologia

O processo de infecção nas células mamíferas pelo T. cruzi envolve uma série de etapas que geram mudanças estruturais, funcionais e bioquímicas na célula hospedeira e no parasita como reflexo de uma série de alterações na expressão gênica. Dentre as tecnologias mais recentes que permitem a análise dessas alterações gênica em grande escala, estão as tecnologias de sequenciamento do RNA (RNA-Seq). Estas permitem a identificação de todos os transcritos de um sistema celular, incluindo aqueles pouco representados, como os de um parasita durante o processo de infecção. O objetivo principal deste trabalho foi a avaliação do perfil da expressão gênica tanto do T. cruzi como da célula hospedeira através da tecnologia de sequenciamento em larga escala. Para tal propósito utilizamos a linhagem celular Vero e as cepas Dm28c e Y do T. cruzi e avaliamos o transcritoma de ambas as células durante a infecção através da tecnologia de RNA-Seq com o equipamento SOLiD (Applied Biosystems). Os pontos avaliados ao longo da cinética de infecção foram 2, 6, 24 e 48 h pós infecção. Um grande número de genes diferencialmente expressos foi identificado na célula hospedeira, totalizando 1061 e 831 genes nas infecções com Dm28c e Y, respectivamente. Esses genes foram relacionados principalmente com a resposta imune, o ciclo celular e sua regulação e metabolismo energético. Os genes modulados positivamente na célula hospedeira durante a infecção foram relacionados à resposta imune como, quimiocinas e citocinas pró e anti-inflamatórias, e ao metabolismo celular, principalmente à B-oxidação de ácidos graxos. Por outro lado, os genes com expressão diminuída estão envolvidos no ciclo celular com papel regulatório na progressão das fases do ciclo e no processo de replicação do DNA. Além disso, foram identificados genes modulados envolvidos na apoptose e citoesqueleto. Este trabalho foi pioneiro ao estudar a modulação do transcritoma do parasita durante a infecção na interação T. cruzi-célula hospedeira. Ao todo 2372 genes foram identificados como modulado em Dm28c e 1233 a cepa Y, dentre os quais, cerca de 46% foram identificados como proteínas hipotéticas. Proteínas de superfície celular que desempenham importante papel na adesão com a célula hospedeira foram reprimidos durante a infecção e representaram 20 % dos genes modulados. Os genes com expressão aumentada em 24 horas para Dm28c e em 6 horas para Y estão envolvidos no metabolismo energético e divisão celular. A infecção com ambas as cepas do T. cruzi levou a uma mudança no transcritoma da célula hospedeira de maneira muito semelhante apesar da diferença no perfil de infecção. Além disso, as cepas do T. cruzi demonstraram utilizar vias de sinalização comuns e particulares durante o processo de infecção.