Papel do receptor 1 de esfingosina-1-fosfato nos distúrbios de migração celular intratímica em camundongos NOD

• Autor(a) principal: Lemos, Julia Pereira
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/31126
• topic: Diabetes Mellitus; Camundongos Endogâmicos; Timo; Integrina alfa5beta1; Integrina alfa5beta1; Diabetes Mellitus; Diabetes Mellitus Tipo 1

Camundongos NOD desenvolvem diabetes tipo 1 (DT1) espontaneamente em decorrência da destruição das células beta pancreáticas de forma T-dependente. Nesse sentido, alguns trabalhos demonstraram o envolvimento do timo na patogênese do DT1. Diversas alterações podem ser observadas no timo de camundongos NOD, como presença de espaços perivasculares (PVS) gigantes contendo timócitos maduros simples-positivos CD4+ e CD8+, além de células T reguladoras Foxp3+. Além disso, timócitos de NOD, principalmente os maduros, apresentam menor expressão da integrina VLA-5 e capacidade migratória reduzida frente ao seu ligante, fibronectina, sugerindo que esse defeito possa estar envolvido na retenção dessas células no órgão. Porém, essa retenção parece ser temporária, sugerindo o envolvimento de outros mecanismos moleculares regulatórios do processo de saída de células T do timo. Diferentes trabalhos demonstraram o papel essencial do receptor 1 de esfingosina-1-fosfato (S1P1) e seu ligante, esfingosina-1-fosfato (S1P), na saída de timócitos do timo em condições normais e patológicas. Sendo assim, o objetivo principal desse trabalho foi investigar o papel das interações mediadas por S1P1 nos distúrbios de migração celular intratímica em camundongos NOD. Através de citometria de fluxo, observamos que timócitos de NOD apresentam menor expressão de S1P1 quando comparados a timócitos de camundongos C57BL/6. Essa menor expressão do receptor também foi observada em timócitos maduros CD62LhiVLA-5-, que apresentam fenótipo condizente com o das células que se encontram retidas nos PVS Ao contrário, células CD62LhiVLA-5+ não apresentaram diferença significativa na expressão do receptor. Uma menor expressão do receptor também foi observada em células com fenótipo regulador Foxp3+, o que pode explicar seu acúmulo no timo e diminuição na periferia. Através de RT-PCR quantitativo, observamos maior expressão de S1P1 nos timócitos de NOD, o que sugere que haja uma regulação na transcrição do gene do S1P1 e uma modulação na expressão proteica do receptor. Ao avaliarmos a expressão da enzima esfingosina-1-fosfato liase 1, responsável por degradar a S1P e manter seus níveis constantes nos tecidos, observamos uma menor expressão em timócitos maduros de NOD. Diminuição semelhante foi associada a redução da expressão do receptor S1P1 e acúmulo de células maduras no timo, em outros modelos. Em ensaios de transmigração celular, observamos que timócitos maduros CD62LhiVLA-5- de camundongos NOD apresentam reduzida capacidade migratória frente a diferentes concentrações de S1P, quando comparados a timócitos de camundongos C57BL/6. Ao contrário, os timócitos maduros CD62LhiVLA-5+ de NOD migraram mais frente às mesmas concentrações. Nós observamos ainda que parece haver uma diminuição da adesão celular à FN quando os timócitos de camundongos C57BL/6 são estimulados simultaneamente com S1P. Não houve diferença na expressão de S1P1 e VLA-5 nas células que se encontram nos linfonodos pancreáticos e no infiltrado inflamatório no pâncreas, sugerindo que as células que conseguem sair do timo não apresentam defeito de expressão desses receptores ou conseguem modular sua expressão na periferia. Em conjunto nossos dados indicam uma modulação de expressão do receptor S1P1 em timócitos de camundongos NOD, colocando a interação S1P/ S1P1 como um potencial componente regulador nos distúrbios migratórios observados nesses animais, assim como na patogênese do DT1.