Estudo da estrutura populacional, virulência e métodos de preservação em cepas mistas de Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii de origem ambiental e clínica

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Nascimento, Carlos Roberto Sobrinho de
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/37807
Resumo: Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii são os agentes etiológicos da criptococose, micose de natureza sistêmica que se destaca entre as infecções fúngicas humanas de maior letalidade, principalmente sob a forma de meningoencefalite, atingindo tanto indivíduos imunocomprometidos como imunocompetentes. Na maioria dos relatos sobre os agentes etiológicos da criptococose estes têm sido estudados a partir de uma única colônia isolada. Este trabalho avaliou a estrutura genética populacional e a virulência de cepas de origem ambiental e clínica, selecionadas a partir dos registros de cepas isoladas com fenótipos atípicos sugestivos de cepas mistas de C. neoformans e C. gattii depositadas e preservadas em coleções de culturas. Para as análises iniciais, 50 colônias puras de uma cepa ambiental e também de uma cepa clínica com fenótipos atípicos foram isoladas para realização dos testes fenotípicos, genotípicos e de virulência. Na população de origem ambiental observou-se a presença de ambas espécies, C. neoformans (VNI) e C. gattii (VGII) caracterizando cepa mista, todas as colônias foram haploides, mating-type \03B1 e colônia albina foi isolada e a mesma foi não virulenta para o modelo in vivo utilizado (Galleria mellonella) Inoculação simultânea de uma colônia de C. neoformans (VNI) e uma colônia de C. gattii (VGII) proveniente da cepa ambiental realizado em G. mellonella não revelou cruzamento interespécies. Já para as colônias isoladas da população clínica, apenas C. neoformans (VNI) foi identificado e todas as colônias foram mating-type \03B1, no entanto, células haploides e diploides foram observadas, o que pode se relacionar com instabilidade fenotípica observada nesta população. Importante heterogeneidade fenotípica foi observada em relação aos fatores de virulência para ambas populações, como produção de melanina, espessura de cápsula e termotolerância. Para o sucesso de estudos futuros, importância deve ser dada aos métodos de preservação a fim de garantir a viabilidade de ambas as espécies em cepas mistas e/ou híbridas. Este estudo apontou a liofilização como melhor método para manutenção mútua de ambas as espécies conjuntamente.
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Este trabalho avaliou a estrutura genética populacional e a virulência de cepas de origem ambiental e clínica, selecionadas a partir dos registros de cepas isoladas com fenótipos atípicos sugestivos de cepas mistas de C. neoformans e C. gattii depositadas e preservadas em coleções de culturas. Para as análises iniciais, 50 colônias puras de uma cepa ambiental e também de uma cepa clínica com fenótipos atípicos foram isoladas para realização dos testes fenotípicos, genotípicos e de virulência. Na população de origem ambiental observou-se a presença de ambas espécies, C. neoformans (VNI) e C. gattii (VGII) caracterizando cepa mista, todas as colônias foram haploides, mating-type \03B1 e colônia albina foi isolada e a mesma foi não virulenta para o modelo in vivo utilizado (Galleria mellonella) Inoculação simultânea de uma colônia de C. neoformans (VNI) e uma colônia de C. gattii (VGII) proveniente da cepa ambiental realizado em G. mellonella não revelou cruzamento interespécies. Já para as colônias isoladas da população clínica, apenas C. neoformans (VNI) foi identificado e todas as colônias foram mating-type \03B1, no entanto, células haploides e diploides foram observadas, o que pode se relacionar com instabilidade fenotípica observada nesta população. Importante heterogeneidade fenotípica foi observada em relação aos fatores de virulência para ambas populações, como produção de melanina, espessura de cápsula e termotolerância. Para o sucesso de estudos futuros, importância deve ser dada aos métodos de preservação a fim de garantir a viabilidade de ambas as espécies em cepas mistas e/ou híbridas. Este estudo apontou a liofilização como melhor método para manutenção mútua de ambas as espécies conjuntamente.Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii are the etiological agents of cryptococcosis, systemic mycosis that stands out among the most lethal human fungal infections, mainly in the form of meningoencephalitis, reaching both immunocompromised and immunocompetent individuals. In the majority of reports of the etiological agents of cryptococcosis these have been studied from unique isolated colony. This work evaluated the genetical population structure and virulence of strains of environmental and clinical origin that were selected from the records of isolated strains with atypical phenotypes suggestive of mixed strains of C. neoformans and C. gattii deposited and preserved in culture collections. For the initial analyzes 50 pure colonies of an atypical phenotype environmental strain and also of a clinical strain were isolated for phenotypic, genotypic and virulence tests. In the population of environmental origin, the presence of both C. neoformans (VNI) and C. gattii (VGII) were characterized by mixed species, all colonies were haploid, mating-type α, and albino colony was isolated and the same was non-virulent for the in vivo model used (Galleria mellonella). Simultaneous inoculation of a colony of C. neoformans (VNI) and a colony of C. gattii (VGII) from the environmental strain carried out in G. mellonella did not reveal interspecies reproduction. For isolate colonies from clinical population only C. neoformans (VNI) was identified and all colonies were mating-type α, however haploid and diploid cells were observed, which may be related to phenotypic instability observed in this population. Significant phenotypic heterogeneity was observed in relation to virulence factors for both populations, such as melanin production, capsule thickness and thermotolerance. For the success of future studies, importance should be given to preservation methods to ensure the viability of both species in mixed and/or hybrid strains. This study pointed to lyophilization as best method for mutual maintenance of both species together.2019-10-17Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil.porCryptococcusCriptococoseVirulênciaCoexistênciaCoinfecçãoPreservaçãoCrytococcus NeoformansCrytococcus GattiiEstruturas fúngicasVirulênciaCoinfecçãoMicosesEstudo da estrutura populacional, virulência e métodos de preservação em cepas mistas de Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii de origem ambiental e clínicainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesis2018Instituto Nacional de Infectologia Evandro ChagasFundação Oswaldo CruzRio de JaneiroPrograma de Pós-Graduação em Pesquisa Clínica em Doenças Infecciosasinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)instname:Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)instacron:FIOCRUZLICENSElicense.txttext/plain1748https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/37807/1/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD51ORIGINALcarlos_nascimento_ini_dout_2018.pdfcarlos_nascimento_ini_dout_2018.pdfapplication/pdf2848249https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/37807/2/carlos_nascimento_ini_dout_2018.pdf078e8cbeaecf80fb2e00be94685a8052MD52TEXTcarlos_nascimento_ini_dout_2018.pdf.txtcarlos_nascimento_ini_dout_2018.pdf.txtExtracted texttext/plain182014https://www.arca.fiocruz.br/bitstream/icict/37807/3/carlos_nascimento_ini_dout_2018.pdf.txt4217e0296f05edc3124f68fa0e8446a5MD53icict/378072023-08-03 09:58:21.231oai:www.arca.fiocruz.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://www.arca.fiocruz.br/oai/requestrepositorio.arca@fiocruz.bropendoar:21352023-08-03T12:58:21Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA) - Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ)false
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