Caracterização molecular dos seis homólogos do fator de início de tradução eIF4E de Trypanosoma cruzi

• Autor(a) principal: Cunha, Camila Sayuri Tominaga da
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da FIOCRUZ (ARCA)
• Texto Completo: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/32107
• topic: Tradução; Trypanosoma Cruzi; Parasitology; Gene Expression Regulation; Parasitología; Regulación de la Expresión Génica; Parasitologia; Regulação da Expressão Gênica

Nos tripanosomatídeos diferentes linhas de evidências indicam que a regulação da expressão gênica ocorre majoritariamente por mecanismos pós-transcricionais, sendo a biossíntese de proteínas, ou tradução, considerada uma etapa crítica para esta regulação. A etapa de iniciação da tradução é, sem dúvida, a mais complexa dentre todo o processo e a mais sujeita a mecanismos de regulação. Dentre as proteínas desenvolvidas no início da tradução, destaca-se o complexo eIF4F, formado pelas proteínas eIF4A, eIF4E e eIF4G. eIF4E parece ser o fator de início limitante e alvo de regulação na maioria dos eucariotos estudados e desta forma, presume-se que a formação de eIF4F é, em grande parte, regulada pela disponibilidade de eIF4E. Em tripanosomatídeos foi observada a ocorrência de múltiplos homólogos para as subunidades eIF4E e eIF4G, entretanto, esta multiplicidade de homólogos não é observada em outros eucariotos unicelulares, como por exemplo em leveduras. Embora existam estudos a cerca destes múltiplos homólogos em T. brucei e Leishmania, até o momento nenhuma função específica para cada homólogo foi caracterizada em T. cruzi, nem tampouco, foi descrito se há redundância em suas funções. Sendo assim, o objetivo desse trabalho é iniciar a caracterização molecular dos seis homólogos do fator de início de tradução eIF4E (eIF4E1-6) de T. cruzi. Para isto, foram produzidos anticorpos policlonais específicos para cada um dos homólogos de TceIF4E. Por ensaios de Western blotting foi visto que a expressão de todos os homólogos é regulada durante a metaciclogênese. Ensaios de imunofluorescência indireta mostraram que TceIF4E1-6 possuem localização citoplasmática no parasito. Além disso, a associação de TceIF4E1-6 com polissomos foi verificada através do fracionamento de extratos de parasitos tratados com cicloheximida e puromicina em gradientes de sacarose, e sugerem funções distintas destes homólogos no processo de tradução. Os resultados obtidos poderão definir se estes fatores estão associados a mecanismos de regulação gênica únicos dos tripanossomatídeos, não encontrados nos demais eucariotos, que possam no futuro contribuir para a produção de quimioterápicos, capazes de inibir especificamente a síntese proteica destes parasitos.