Desenvolvimento e validação de um método analítico para a quantificação de GHB-GLUC e de GABA em sangue com fins forenses

• Autor(a) principal: Dias, Ana Sofia Santos
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/22711
• topic: Bioquímica clínica; Toxicologia forense; Sangue - Análise química; Metabolitos; Espectrometria de massa

O ácido γ-hidroxibutírico (GHB) é um composto endógeno, sendo simultaneamente metabolito e precursor do neurotransmissor ácido γ-aminobutírico (GABA). O GHB está incluído no panorama de substâncias ilícitas disponíveis com fins psicoativos. Os contextos de utilização ilícita são maioritariamente caracterizados por fins recreativos ou como substância facilitadora de crime de abuso sexual, entre outros. A curta janela de deteção do GHB levanta algumas dificuldades. Neste sentido, a recente descoberta do metabolito glucuronizado do GHB (GHB-GLUC) levantou uma possibilidade de aumento da janela de deteção do GHB. Por outro lado, o estudo do comportamento post-mortem do GHB e, também, do GABA, despertou o interesse a fim de contribuir para uma estimação do intervalo post-mortem (PMI). Assim, é emergente a necessidade de colmatar as dificuldades referidas. Nesse sentido, são objetivos deste trabalho o estudo das vias de fragmentação dos compostos GHB-GLUC e GABA, após ionização por impacto eletrónico, em GC-MS/MS, para posterior validação de um método analítico para a quantificação simultânea do GHB-GLUC e do GABA, aliado ainda à quantificação de GHB, em amostras reais de sangue total. Através do estudo dos mecanismos de fragmentação mais prováveis, foi possível escolher, de forma sustentada, os iões precursores e iões produto considerados mais favoráveis para posterior deteção e quantificação do GHB-GLUC e do GABA. Relativamente à validação do método para o GHB-GLUC, a metodologia extrativa escolhida foi a precipitação proteica com metanol. Para a validação do método analítico estudaram-se diversos parâmetros: a especificidade/seletividade, a linearidade, os limites de deteção e de quantificação, a precisão, a exatidão, a recuperação e a robustez do método. Relativamente ao GABA, não se obtiveram resultados reprodutíveis para este composto, tendo-se verificado, ainda, instabilidade das soluções após derivatização. A metodologia analítica desenvolvida cumpriu todos os critérios de validação exigidos, o que permitiu a aplicação da mesma a um conjunto de amostras reais: uma amostra de soro positiva para GHB e uma série de amostras de sangue periférico post-mortem¸ nas quais se conhece a data e hora do óbito e a data e hora de cada uma das duas colheitas realizadas (uma no momento da admissão do cadáver e outra na autópsia). Foi possível detetar e quantificar GHB-GLUC na amostra positiva para GHB, tendo-se verificado, pela primeira vez na literatura, uma relação entre um contexto de intoxicação por GHB e a presença de GHB-GLUC. No que diz respeito à série de amostras post-mortem analisadas, em nenhuma das amostras se verificou a presença de GHB-GLUC. Estes resultados permitem levantar questões relativas à real importância desta via de metabolização do GHB, nomeadamente no post-mortem. Quanto ao GHB, verificou-se uma diferença estatisticamente significativa entre as concentrações médias do metabolito na primeira e na segunda colheitas. Tendo-se, ainda, verificado uma correlação positiva forte (r=0,902) entre as concentrações de GHB post-mortem e o respetivo PMI na primeira colheita (ou seja, até às 10 horas de PMI). Concluindo, este estudo forneceu dados relevantes para o potencial da análise do GHB-GLUC em casos de suspeita de consumo exógeno de GHB. Adicionalmente, os resultados obtidos neste estudo sugerem que existe uma maior correlação entre o PMI e a concentração de GHB, nas primeiras 10 horas após a morte.