Pesquisa e quantificação de vírus e bactérias por PCR em tempo real

• Autor(a) principal: Duarte, Daniela Patrícia Crespo
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/33113
• topic: qPCR; PRRSV; PCV2; Leptospira; Mycoplasma; E. coli; Diagnóstico

Com o aumento da população mundial existe cada vez mais uma procura por alimentos mais seguros microbiologicamente, com melhor qualidade e com um menor tempo de produção. Nesse âmbito a produção intensiva de gado tornou-se uma indústria em crescimento para suprimir esta lacuna. No entanto, por vezes, os microrganismos patogénicos infetam estas produções e condicionam a saúde do animal e o seu uso posterior como alimento. Neste aspeto o diagnóstico rápido de modo a identificar o agente patogénico que infeta o animal torna-se essencial para o seu tratamento. Assim, o objetivo desta dissertação foi a pesquisa e o diagnóstico de microrganismos patogénicos em amostras de animais (suínos e aves) de gado intensivo pelo método de PCR em tempo real. As análises foram realizadas no Laboratório Tomaz, Leiria, que presta entre outros serviços análises veterinárias. Deste modo, foram analisadas amostras de órgãos/tecidos de suínos para o despiste de Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV), de Leptospira spp. e de Porcine Circovirus Type 2 (PCV2), amostras de soros de suínos para despiste de PRRSV e PCV2, fezes de suínos para pesquisa de fatores de virulência de E. coli e amostras de fluidos orais de aves para pesquisa de Leptospira spp. e de Mycoplasma gallisepticum e Mycoplasma synoviae. Aquando da sua receção as amostras de órgãos/tecidos foram armazenadas a -20ºC e analisadas entre 48-72h após a colheita enquanto as amostras de soros, fluidos orais e fezes foram armazenadas a 4ºC e analisadas entre 24-72h após a colheita. Para a análise do PRRSV, extraiu-se o RNA das amostras enquanto que para a análise de PCV2, Leptospira, fatores de virulência da E. coli e de M. gallisepticum e M. synoviae foi extraído o DNA. Para a deteção destes patogénicos, kits específicos foram usados segundo as instruções do fabricante e os alvos de deteção pelo método de qPCR foram: a ORF7 para o PRRSV, a ORF2 para o PCV2, o gene lipL32 para a Leptospira patogénica e os genes mgc2 e vlhA para a deteção de Mycoplasma gallisepticum e Mycoplasma synoviae, respetivamente. Para a pesquisa de fatores de virulência de E. coli os genes associados às adesinas fimbriais F4 e F18 foram os pesquisados. Após a pesquisa, foi detetado a presença de PRRSV e PCV2 em amostras de soro, a presença de ambas as adesinas fimbriais F4 e F18 em amostras de fezes e a presença de M. gallisepctium e/ou M. synoviae em amostras de fluidos orais. Assim, verificou-se que as amostras de soro eram adequadas para detetar o PRRSV e o PCV2, que as amostras de órgãos/tecidos e de fluidos orais não eram as mais indicadas para detetar a Leptospira. As amostras de fluidos orais eram apropriadas para detetar o M. gallisepctium e M. synoviae e amostras de fezes mostrara-se eficazes para a deteção das adesinas F4 e F18.