Metaciclogénese de Leishmania sp in vitro - análise cinética e morfológica

• Autor(a) principal: FARINHA, Ana Cristina Oliveira
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/50536
• topic: Parasitologia médica; Leishmania sp; Metaciclogénese; Análise cinética; Morfologia; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas

Foi só em 1984 que, Sacks&Perkins, demonstraram in vitro e no vector o desenvolvimento de promastigotas de Leishmania tropica de um estadio não infeccioso (procíclicas) para formas infecciosas (metacíclicas). Este processo foi denominado de metaciclogénese. As formas metacíclicas são caracterizadas por possuírem um corpo celular pequeno e fino e um flagelo muito longo, e ocorrer em maior número durante a fase estacionária de crescimento em meio de cultura (Sacks&Perkins, 1984; Franke et al., 1985; Da Silva&Sacks, 1987; Sacks, 1989; Grimm et al., 1991; Saraiva et al., 2005). Diversos estudos sugerem o comprimento celular como um parâmetro eficaz na distinção das formas procíclicas das metacíclicas (Grimm et al., 1991; Saraiva et al., 2005; Späth&Beverley, 2001). Neste estudo, foram analisadas diariamente seis culturas axénicas, duas L. braziliensis (1794 e LC2452cl8), três L. infantum (IMT151, IMT260 e IMT373) e uma L. peruviana (HR78cl8) de forma a ser possível, no final, obter uma curva de crescimento para cada estirpe, isto é, a cinética e a concentração dos parasitas em função do tempo, bem como o perfil da metaciclogénese de cada uma. O crescimento foi estudado em dois meios de cultura, Schneider e Grace, ambos suplementados com 10% de FBS e pH de 5.5. Foram realizados estudos de crescimento dos parasitas em cultura e estudos morfológicos dos promastigotas sendo a variável dependente a média do comprimento dos promastigotas e tendo como variáveis independentes a estirpe, o meio de cultura e a fase de crescimento. O teste da Lise pelo Complemento foi usado como método de isolamento das formas metacíclicas em cultura (Franke et al., 1985; Puentes et al., 1988; Da Silva&Sacks, 1987, Sacks&Perkins, 1984; Sacks, 1989; Grimm et al., 1991). Os parasitas de todas as estirpes estudadas revelaram, em cultura axénica de meio Schneider, uma cinética de crescimento mais rápida, uma maior concentração de promastigotas, uma fase estacionária mais curta e um menor tempo de vida que as mesmas estirpes em meio Grace. Estes resultados sugerem que o meio de cultura usado influencia a cinética de crescimento e a longevidade de uma estirpe in vitro. Relativamente ao perfil da metaciclogénese, foi também no meio de cultura Schneider que, todas as estirpes, apresentaram populações em cultura com percentagens de formas metacíclicas mais elevadas do que no meio Grace. A maior percentagem de formas metacíclicas foi atingida, para todas as estirpes, e independentemente do meio, durante a fase de declínio da curva de crescimento apesar do máximo de concentração de promastigotas em solução corresponder ao início da fase estacionária de crescimento. Os resultados do estudo morfológico dos parasitas, mais precisamente a análise da evolução do comprimento destes ao longo da sua curva de crescimento, mostraram não existir uma diferença significativa do tamanho médio dos parasitas no meio de cultura Schneider do tamanho no meio de cultura Grace para uma mesma estirpe, levando a concluir que o meio de cultura não influencia o tamanho dos promastigotas. Contudo, no que diz respeito às fases de crescimento das culturas – fase logarítmica e fase estacionária, verificou-se, para todas as estirpes, uma diferença significativa entre o tamanho médio dos promastigotas entre as duas fases de crescimento, independentemente do meio de cultura. O tamanho médio de parasita foi, para todas as estirpes, sempre significativamente inferior na fase estacionária. Comparando os valores do comprimento médio dos promastigotas apresentados pelo teste do Complemento e os obtidos no estudo de cinética, para cada estirpe e na mesma fase de crescimento, verificou-se que foi com a aplicação do teste do Complemento que se obtiveram os valores mais baixos de tamanho médio dos parasitas, sugerindo que com a aplicação deste teste obtêm-se populações de formas metacíclicas mais homogéneas isto é, obtêm-se um eficaz isolamento destas formas. Assim sendo, obteve-se neste trabalho, um comprimento médio dos promastigotas metacíclicos de 6,98 m para L. braziliensis, de 5,72 m para L. peruviana e de 7,70 m para L. infantum.