Desenvolvimento de novas estratégias metodológicas para avaliação de compostos com potencial terapêutico para a tuberculose e outras micobacterioses

• Autor(a) principal: LOPES, Elizeth do Rosário Delgado
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/19059
• topic: Microbiologia médica; Micobactérias; Terapêutica; Infeções; Antibióticos; Tuberculose; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas

A multirresistência aos antibióticos em micobactérias, em particular Mycobacterium tuberculosis, é hoje um problema de saúde pública global. Atualmente, para além da ocorrência de mutações, o efluxo de antibióticos é considerado um importante fator no desenvolvimento de resistência, abrindo novas perspetivas no desenho de esquemas terapêuticos para as infeções causadas por estirpes resistentes, nomeadamente pela combinação de antibióticos e inibidores de efluxo. Nesta Dissertação, foi desenhado um modelo para rastreio e identificação de compostos com atividade antimicobacteriana e/ou inibitória de efluxo, usando duas estirpes isogénicas de Mycobacterium smegmatis; mc2155 (estirpe selvagem) e XZL1675 (mc2155 ΔlfrA), que diferem entre si na capacidade de efluxo, devido à deleção parcial da bomba de efluxo LfrA. Neste modelo, os compostos são avaliados através da determinação da sua concentração mínima inibitória (CMI) e da capacidade, a uma concentração subinibitória, de redução de CMIs de antibióticos e brometo de etídio (EtBr). Os compostos com CMIs baixas (20 M) são classificados como potenciais antimicobacterianos, enquanto aqueles capazes de reduzir (≥ 4x) a CMI de outros compostos são classificados como potenciais adjuvantes. Dentro destes, a redução da CMI do EtBr, um substrato comum de bombas de efluxo, em conjunto com ensaios fluorométricos, são utilizados para distinguir potenciais inibidores de efluxo. Efeitos de sinergismo entre os restantes potenciais adjuvantes e os antibióticos são avaliados por ensaios de “checkerboard”. O modelo foi testado utilizando os compostos de referência clorpromazina, tioridazina e verapamil. Como esperado, o verapamil demonstrou ser o inibidor de efluxo mais eficaz, enquanto a clorpromazina e tioridazina apresentaram atividade antimicobacteriana e de inibição de efluxo moderadas. De seguida, o modelo foi aplicado a três novos compostos, um fenilimidazolo (Q-15.252), que apresentou apenas atividade antimicobacteriana moderada e dois tiazoisoxazolos (EA156 e EA160), que apresentaram atividade inibitória de efluxo, que no caso de EA160, foi superior à do verapamil. Em conclusão, o modelo desenhado permite um rastreio rápido e económico de um elevado número de compostos em condições de biossegurança e a identificação de potenciais antimicobacterianos ou inibidores de efluxo, como o composto EA160.