Vesículas extracelulares de Leishmania amazonensis: activação de macrófagos murinos e antigenicidade

• Autor(a) principal: FREITAS, Bruna Eugênia de
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10362/138130
• topic: Parasitologia médica; Leishmania amazonensis; Vesículas extracelulares; Polarização de macrófagos; Antigenicidade; Domínio/Área Científica::Ciências Médicas

Leishmanioses são um grupo de doenças, causadas por protozoários do gênero Leishmania, transmitidos ao homem e outros mamíferos através da picada de fêmeas de flebotomíneos infectadas. Há duas formas clínicas principais da doença: leishmaniose visceral (LV) e leishmaniose tegumentar (LT), sendo a última subdividida em leishmaniose cutânea, leishmaniose muco-cutânea, leishmaniose difusa e leishmaniose disseminada. As leishmanioses pertencem ao grupo de doenças negligenciadas, que são responsáveis pela morte e incapacidade de milhões de pessoas por ano, evidenciando uma necessidade de atenção. O papel das vesículas extracelulares (VEs) de parasitas do gênero Leishmania tem sido amplamente estudado, uma vez que, nos últimos anos, os resultados apontam para uma função imunomoduladora favorável à infecção. Este trabalho teve como objetivo analisar a imunogenicidade das proteínas das VEs de formas promastigotas de três estirpes de L. amazonensis e investigar o efeito das VEs na ativação de macrófagos murinos. Este estudo foi constituído por três etapas: (i) VEs de culturas axênicas de promastigotas de L. amazonensis, estirpes M2269, BA125 e BA336, foram purificadas; (ii) foi analisado o efeito das VEs na atividade dos MØ, pela quantificação da produção de ureia, através de ensaios colorimétricos e pela produção de IL-1β; a atividade dos MØ como células apresentadoras de antígeno foi avaliada indiretamente, através da expressão de moléculas de classe I (MHC I) e de classe II (MHC II) do complexo maior de histocompatibilidade, por citometria de fluxo; (iii) foi estudado o perfil e imunorreatividade das proteínas das VEs, utilizando como ferramentas a eletroforese de proteínas em gel de poliacrilamida na presença de SDS (SDS-PAGE), a eletroforese bidimensional (2-DE) e teste de Western-blot das proteínas, utilizando soro de camundongos infectados por L. amazonensis e soro de humanos portadores de Leishmaniose tegumentar americana (LTA). Os MØ estimulados com VEs a 7,09μg/μL produziram significativamente mais ureia que o controlo negativo. A estimulação com VEs provocaram, nos MØ, a redução da produção de IL-1β, em relação à produção basal do controle negativo. As VEs de L. amazonensis não interferem com a expressão das moléculas de classe I e II do MHC. A eletroforese das VEs em SDS-PAGE evidenciou um perfil proteico semelhante nas estirpes BA125 e BA336, mas diferente na estirpe M2269. As VEs possuem proteínas que foram reconhecidas por anticorpos de camundongos BALB/c previamente infetados com L. amazonensis, assim como por anticorpos de humanos portadores de LTA. As VEs de L. amazonensis partilham proteínas com o parasita, nomeadamente a proteína de superfície gp63 e a proteína citoplasmática HSP70, não promovem ambientes pro-inflamatórios e evitam estimular a apresentação antigênica, minimizando a actividade da imunidade celular e favorecendo a infecção e a sobrevivência do parasita. Estudos futuros são necessários para clarificar os efeitos das VEs na LTA, incluindo a identificação de outras proteínas, que podem exercer um papel importante no microambiente imunitário.