Screening of class 1 integrons in clinical isolates of Gram-negative bacteria

• Autor(a) principal: Santos, Cátia Raquel Talhas
• Data de Publicação: 2009
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/8919
• topic: Microbiologia molecular; Bactérias; Resistência a antibióticos; Microorganismos patogénicos; Infecções hospitalares

Actualmente, é cada vez mais frequente a associação de bactérias oportunistas e comensais resistentes a antibióticos com infecções nosocomiais. Este problema clínico tornou-se preocupante e deve-se ao uso indiscriminado de antibióticos. Perante esta pressão selectiva, as bactérias desenvolvem diferentes mecanismos de resistência a estes compostos. A presença de estruturas capazes de transportar genes de resistência, designadas por integrões, que contribuem para a disseminação destes genes bem como a sua associação com o perfil de resistência de bactérias constitui o objectivo do presente trabalho. Assim, foram recolhidas amostras de superfícies das instalações sanitárias, do serviço de Medicina II, do Hospital Infante D. Pedro, Aveiro. Após o isolamento das bactérias em meio selectivo para Gramnegativas (MacKonkey), todos os isolados foram sujeitos a tipagem molecular por BOX-PCR. O perfil de bandas obtido após electroforese foi analisado com o programa GelCompar II software (Applied Maths, Kortrijk, Belgium), permitindo distinguir diferentes grupos clonais. De cada grupo clonal foi seleccionado um isolado para os estudos posteriores, resultando num total de 45 isolados distintos. A pesquisa de integrões classe 1 iniciou-se por um “screening” para o gene da integrase. Nos 25 isolados positivos para este gene, foi amplificada e caracterizada a respectiva região variável. A sequência nucleotídica dos amplicões foi comparada com outras depositadas na base de dados. Os resultados mostraram a presença de integrões em diferentes espécies (Pseudomonas putida, Klebsiella pneumoniae, Escherichia coli, Pseudomonas mendocina, Proteus mirabillis e Morganella morganii). As regiões variáveis apresentavam diferentes tamanhos e diferentes arranjos de genes. Em geral, predominam gene cassettes que conferem resistência aos aminoglicosídeos, trimetoprime e metalo-β- lactamases. A localização destas estruturas no genoma bacteriano foi efectuada por “southern blot”; o DNA genómico foi digerido com a enzima S1, e sujeito a hibridação com sondas para os genes 16S e da integrase revelando que a maioria dos integrões estão localizados em plasmídeos. Como conclusão geral, verifica-se a prevalência de isolados contendo determinantes genéticos de resistência em superfícies inanimadas do ambiente hospitalar (53.33%), os quais podem constituir um potencial risco para os pacientes, uma vez que se trata de bactérias oportunistas. O facto de estes genes de resistência estarem associados a elementos genéticos móveis, nomeadamente transposões e muitas vezes plasmídeos, facilita a sua disseminação no ambiente hospitalar, principalmente por transferência horizontal de genes.