Proteómica das glândulas salivares de ratinho

• Autor(a) principal: Caseiro, Armando José Cerejo
• Data de Publicação: 2007
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/2959
• topic: Métodos biomoleculares; Glândulas salivares; Proteómica; Electroforese de proteínas

A saliva é uma mistura complexa de proteínas, glicoproteínas, enzimas, hormonas, minerais e desempenha funções fisiológicas importantes. A maior produção de proteínas da saliva ocorre nas glândulas salivares, parótida, submandibular e sublingual e outras pequenas glândulas da mucosa oral. Apesar das glândulas salivares apresentarem fulcral importância para compreensão de determinadas patologias orais, o conhecimento da sua expressão proteica é ainda reduzido. Assim, o objectivo principal deste trabalho caracterização do proteoma das glândulas salivares, usando o ratinho como modelo animal. A caracterização do proteoma glandular envolveu o fraccionamento subcelular das glândulas parótida e submandibular, obtendo-se para cada uma delas, as fracções nuclear, citoplasmática e a correspondente aos grânulos secretores. Complementarmente foram isoladas células acinares das glândulas, procedendo-se ao seu fracionamento com obtenção da fracção citoplasmática. análise das diferentes fracções efectuou-se utilizando electroforese bidimensional e cromatografia líquida de alta resolução para a separação proteínas e péptidos e a digestão tríptica para posterior identificação por espectrometria de massa. Após a análise comparativa dos mapas 2DE das glândulas parótida submandibular observaram-se perfis característicos distintos. Dos mapas 2DE obtidos para as diferentes fracções de parótida e submandibular foram identificadas, respectivamente, um total de 125 e 100 proteínas, sendo 33 das quais comuns. Da análise dos digestos trípticos dos grânulos indentificaram- parótida 52 péptidos pertencentes a 17 proteínas e na submandibular 255 péptidos pertencentes a 19 proteínas. As diferentes proteínas identificadas pertenciam as diversas classes funcionais, destacando-se a classe proteolítica. Ambas as glândulas apresentaram uma grande variedade de calicreínas, principalmente a glândula submandibular onde se identificaram 15 membros desta família. Este trabalho apresenta uma abordagem generalista da composição proteica das diferentes fracções das glândulas salivares de ratinho, facilitando desenvolvimento futuro de investigações mais específicas e/ou relacionadas com uma patologia específica. ABSTRACT: Saliva is a complex mixture of proteins, glycoproteins, enzymes and hormones that play important physiological functions. The main protein sources of saliva are the salivary glands; parotid, submandibular, sublingual and numerous small glands distributed on the oral mucosa. The knowledge of salivary glands protein expression is scarce and important for the understanding of some oral pathologies. The aim of this work is the characterization of the mouse salivary glands proteome, using the mouse as the animal model. For the glandular proteome characterisation subcelular fractionation of the parotid and submandibular glands was performed, getting for each gland the nuclear, cytoplasmic and secretory granules fractions. Complementarily, glandular acinar cells were isolated and fractionated and the cytoplasmic fraction characterised. The analysis of the different fractions were performed by the separation of proteins and peptides by two-dimension gel electrophoresis (2DE) and high resolution liquid chromatography (HPLC-MS) and tryptic digestion used to further mass spectrometry identification. After the comparative analysis of mouse parotid and submandibular 2DE maps, we observed distinct profiles. From the 2DE maps obtained to the different fractions of parotid and submandibular were respectively identified a total of 125 and 100 proteins, being 33 of them commons. From the HPLC-MS data were identified 52 peptides belonging to 17 proteins in parotid and 255 peptides that belong to 19 proteins in submandibular gland. The different proteins identified belong to several functional classes, namely the proteolytic ones. In the submandibular gland about 32% of the identified proteins were from kallikreins family. The salivary glands express a great variety of kallikreins, mainly the submandibular gland in which was identified 15 proteins of this family. This work is a general approach to the protein composition of the different mouse salivary glands fractions, contributing to future research with clinical applications.