Lichenicidin: regulation, expression and bioengineering in E.coli

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Barbosa, Joana Cristina Pacheco
Data de Publicação: 2012
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: eng
Título da fonte: Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
Texto Completo: http://hdl.handle.net/10773/9548
Resumo: A lichenicidina e um lantibiotico de classe II, naturalmente produzido por B. licheniformis I89. E constituida por dois peptidos denominados Blia e Blib. Este lantibiotico foi o primeiro a ser expresso completamente in vivo num hospedeiro Gram negativo (Escherichia coli). Neste trabalho, pretendeu-se avaliar o impacto da proteina LicR na biossintese da lichenicidina usando um sistema de expressao heterologa em E. coli. A estirpe de E. coli que nao contem o gene licR parece apresentar uma maior producao de lichenicidin do que a estirpe que contem todo o conjunto de genes envolvidos na sintese da lichenicidin. Assim, LicR parece nao apresentar qualquer funcao regulatoria em E. coli ou esta nao podera ser descrita segundo os mecanismos habituais de regulacao da producao de lantibioticos. Paralelamente um sistema de expressao foi construido para produzir cada um dos peptidos da lichenicidina separadamente, tendo sido comparados os niveis de producao de cada um dos peptidos. Este sistema foi usado com sucesso para produzir o peptido BliƒÀ mas nao apresentando qualquer vantagem sobre os sistemas ao nivel da producao. Finalmente, uma biblioteca de mutagenese do peptido Bliƒ¿ foi construida em E. coli e os clones obtidos foram analisados; a maioria dos clones obtidos apresentou bioatividade reduzida ou nula contra Micrococcus luteus. Alguns destes clones foram sequenciados para determinar qual(ais) a(s) mutacao(oes) presente(s) no gene licA1.
id RCAP_a149acda2bb828b5d00f6350cb2e8bb5
oai_identifier_str oai:ria.ua.pt:10773/9548
network_acronym_str RCAP
network_name_str Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
repository_id_str 7160
spelling Lichenicidin: regulation, expression and bioengineering in E.coliBiologia molecularPéptidosAntibióticosBioengenhariaA lichenicidina e um lantibiotico de classe II, naturalmente produzido por B. licheniformis I89. E constituida por dois peptidos denominados Blia e Blib. Este lantibiotico foi o primeiro a ser expresso completamente in vivo num hospedeiro Gram negativo (Escherichia coli). Neste trabalho, pretendeu-se avaliar o impacto da proteina LicR na biossintese da lichenicidina usando um sistema de expressao heterologa em E. coli. A estirpe de E. coli que nao contem o gene licR parece apresentar uma maior producao de lichenicidin do que a estirpe que contem todo o conjunto de genes envolvidos na sintese da lichenicidin. Assim, LicR parece nao apresentar qualquer funcao regulatoria em E. coli ou esta nao podera ser descrita segundo os mecanismos habituais de regulacao da producao de lantibioticos. Paralelamente um sistema de expressao foi construido para produzir cada um dos peptidos da lichenicidina separadamente, tendo sido comparados os niveis de producao de cada um dos peptidos. Este sistema foi usado com sucesso para produzir o peptido BliƒÀ mas nao apresentando qualquer vantagem sobre os sistemas ao nivel da producao. Finalmente, uma biblioteca de mutagenese do peptido Bliƒ¿ foi construida em E. coli e os clones obtidos foram analisados; a maioria dos clones obtidos apresentou bioatividade reduzida ou nula contra Micrococcus luteus. Alguns destes clones foram sequenciados para determinar qual(ais) a(s) mutacao(oes) presente(s) no gene licA1.Lichenicidin is a class II lantibiotic, naturally produced by Bacillus licheniformis I89 strain. It is composed by two peptides: Bliα and Bliβ. This was the first lantibiotic to be fully produced in vivo using a Gram negative host (Escherichia coli). Herein, the impact of LicR protein in lichenicidin biosynthesis was assessed, using an E. coli heterologous expression system. It was shown that the E. coli strain without the licR gene presented increased lichenicidin production, when compared with the strain containing the entire gene cluster. Thus, if LicR presents some regulatory function in E. coli, its role cannot be described according to the usually proposed regulation mechanisms involved in lantibiotic production. Also, an expression system was constructed to produce each lichenicidin peptide independently and this expression system was compared with other available systems in terms of production levels. The system was successfully used to obtain Bliβ peptide. However it did not show any advantage over the systems previously developed. Ultimately, a mutagenesis library of Bliα was constructed in E. coli and the clones were analyzed; the majority of the clones showed low or null bioactivity against Micrococcus luteus. Some of these clones were sequenced to determine which mutation(s) was present in the licA1 gene.Universidade de Aveiro2013-11-27T08:46:05Z2012-07-12T00:00:00Z2012-07-12info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfhttp://hdl.handle.net/10773/9548engBarbosa, Joana Cristina Pachecoinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãoinstacron:RCAAP2024-02-22T11:16:22Zoai:ria.ua.pt:10773/9548Portal AgregadorONGhttps://www.rcaap.pt/oai/openaireopendoar:71602024-03-20T02:46:21.789776Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informaçãofalse
dc.title.none.fl_str_mv Lichenicidin: regulation, expression and bioengineering in E.coli
title Lichenicidin: regulation, expression and bioengineering in E.coli
spellingShingle Lichenicidin: regulation, expression and bioengineering in E.coli
Barbosa, Joana Cristina Pacheco
Biologia molecular
Péptidos
Antibióticos
Bioengenharia
title_short Lichenicidin: regulation, expression and bioengineering in E.coli
title_full Lichenicidin: regulation, expression and bioengineering in E.coli
title_fullStr Lichenicidin: regulation, expression and bioengineering in E.coli
title_full_unstemmed Lichenicidin: regulation, expression and bioengineering in E.coli
title_sort Lichenicidin: regulation, expression and bioengineering in E.coli
author Barbosa, Joana Cristina Pacheco
author_facet Barbosa, Joana Cristina Pacheco
author_role author
dc.contributor.author.fl_str_mv Barbosa, Joana Cristina Pacheco
dc.subject.por.fl_str_mv Biologia molecular
Péptidos
Antibióticos
Bioengenharia
topic Biologia molecular
Péptidos
Antibióticos
Bioengenharia
description A lichenicidina e um lantibiotico de classe II, naturalmente produzido por B. licheniformis I89. E constituida por dois peptidos denominados Blia e Blib. Este lantibiotico foi o primeiro a ser expresso completamente in vivo num hospedeiro Gram negativo (Escherichia coli). Neste trabalho, pretendeu-se avaliar o impacto da proteina LicR na biossintese da lichenicidina usando um sistema de expressao heterologa em E. coli. A estirpe de E. coli que nao contem o gene licR parece apresentar uma maior producao de lichenicidin do que a estirpe que contem todo o conjunto de genes envolvidos na sintese da lichenicidin. Assim, LicR parece nao apresentar qualquer funcao regulatoria em E. coli ou esta nao podera ser descrita segundo os mecanismos habituais de regulacao da producao de lantibioticos. Paralelamente um sistema de expressao foi construido para produzir cada um dos peptidos da lichenicidina separadamente, tendo sido comparados os niveis de producao de cada um dos peptidos. Este sistema foi usado com sucesso para produzir o peptido BliƒÀ mas nao apresentando qualquer vantagem sobre os sistemas ao nivel da producao. Finalmente, uma biblioteca de mutagenese do peptido Bliƒ¿ foi construida em E. coli e os clones obtidos foram analisados; a maioria dos clones obtidos apresentou bioatividade reduzida ou nula contra Micrococcus luteus. Alguns destes clones foram sequenciados para determinar qual(ais) a(s) mutacao(oes) presente(s) no gene licA1.
publishDate 2012
dc.date.none.fl_str_mv 2012-07-12T00:00:00Z
2012-07-12
2013-11-27T08:46:05Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://hdl.handle.net/10773/9548
url http://hdl.handle.net/10773/9548
dc.language.iso.fl_str_mv eng
language eng
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.publisher.none.fl_str_mv Universidade de Aveiro
publisher.none.fl_str_mv Universidade de Aveiro
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
instname:Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
instacron:RCAAP
instname_str Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
instacron_str RCAAP
institution RCAAP
reponame_str Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
collection Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos)
repository.name.fl_str_mv Repositório Científico de Acesso Aberto de Portugal (Repositórios Cientìficos) - Agência para a Sociedade do Conhecimento (UMIC) - FCT - Sociedade da Informação
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1799137515357077504

Registros relacionados