Avaliação de superovulação em bovinos pela análise de hemácias por meio de microscopia de força atômica

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Oliveira, Karine Meira de
Data de Publicação: 2010
Tipo de documento: Artigo
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UCB
Texto Completo: https://repositorio.ucb.br:9443/jspui/handle/123456789/8365
Resumo: A técnica de superovulação em vacas vem sendo desenvolvida e aprimorada com o intuito de aumentar a eficiência reprodutiva, maximizando a reprodução de animais geneticamente superiores. O tratamento superovulatório tem em vista neutralizar os efeitos da dominância folicular que é relacionada com a divergência de crescimento entre o maior folículo e o segundo maior, evitando que ocorram as diferenças foliculares e permitindo que vários folículos adquiram características fisiológicas similares às do folículo dominante. Quando então ocorre a finalização do processo de superovulação, ocorre a aspiração folicular, essa aspiração tem a necessidade de uma ecografia para acompanhamento da retirada de folículos diretamente do ovário a qual por vezes gera falsos resultados, ou seja, quando a novilha não alcança a superovulação. Por esses motivos o desenvolvimento de alternativas de diagnóstico de superovulação constitui um desafio em zootecnia. Considerando que hemácias podem ser estruturalmente alteradas por protocolos de superovulação, a utilização de técnicas de investigação morfológica em alta resolução como a microscopia de força atômica (MFA) visando avaliar e diagnosticar novilhas submetidas a protocolos superovulatórios. O objetivo do presente estudo foi de avaliar possíveis alterações nas características estruturais de hemácias de novilhas submetidas a protocolos de superovulação, visando possibilitar um rápido teste diagnóstico, utilizando MFA. Foram selecionadas 22 novilhas cíclicas da raça Nelore, a amostra foi dividida em três grupos de tratamentos aleatoriamente, grupo controle, SOV-LH (superovulação com FSH e LH) e SOV (Superovulação com FSH), a amostragem passou pelos três tratamentos, sofrendo o chamado cross-over, sendo que para cada início de tratamento foi necessária a espera de 30 dias após o término do tratamento anterior. A coleta de sangue foi realizada no dia 12 durante o momento da aspiração folicular. Foi feito um esfregaço com um μL de sangue de cada amostra sobre a superfície de uma lamínula de vidro circular utilizando uma lâmina de vidro em um ângulo de aproximadamente 45°. Foi feito aquisição de imagem por meio de MFA analisando os parâmetros qualitativamente e quantitavamente. As amostras foram analisadas quanto a nanorrugosidade através do software Gwyddion. As análises estatísticas univariadas foram realizadas com o modelo de estudo one-way ANOVA utilizando teste de Tukey com nível significância fixado em 5%, o qual não demonstrou significância para distinção entre os três grupos. Os resultados da análise discriminante linear utilizando os parâmetros de nanorrugosidade, apresentaram confirmação classificatória total em 93% para as amostras investigadas, possibilitando que tal estratégia seja aprimorada com vistas a utilização futura em estratégias de diagnóstico de superovulação.
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Quando então ocorre a finalização do processo de superovulação, ocorre a aspiração folicular, essa aspiração tem a necessidade de uma ecografia para acompanhamento da retirada de folículos diretamente do ovário a qual por vezes gera falsos resultados, ou seja, quando a novilha não alcança a superovulação. Por esses motivos o desenvolvimento de alternativas de diagnóstico de superovulação constitui um desafio em zootecnia. Considerando que hemácias podem ser estruturalmente alteradas por protocolos de superovulação, a utilização de técnicas de investigação morfológica em alta resolução como a microscopia de força atômica (MFA) visando avaliar e diagnosticar novilhas submetidas a protocolos superovulatórios. O objetivo do presente estudo foi de avaliar possíveis alterações nas características estruturais de hemácias de novilhas submetidas a protocolos de superovulação, visando possibilitar um rápido teste diagnóstico, utilizando MFA. 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As análises estatísticas univariadas foram realizadas com o modelo de estudo one-way ANOVA utilizando teste de Tukey com nível significância fixado em 5%, o qual não demonstrou significância para distinção entre os três grupos. Os resultados da análise discriminante linear utilizando os parâmetros de nanorrugosidade, apresentaram confirmação classificatória total em 93% para as amostras investigadas, possibilitando que tal estratégia seja aprimorada com vistas a utilização futura em estratégias de diagnóstico de superovulação.The superovulation technique in cattle has been developed and improved in order to enhance the reproductive efficiency, maximizing reproduction of genetically superior animals. The superovulatory treatment aims to neutralize the effects of follicular dominance which is related to the divergence of growth between the larger and second largest follicle, avoiding the follicular differences and allowing multiple follicles to acquire physiological characteristics similar to those of the dominant follicle. When an entire protocol in finished, the oocytes recovery occurs, and the aspiration is necessary to monitor through an ultrasound which sometimes leads to false results, in other words, when the heifer does not reach the superovulation. Therefore, the development of alternative diagnostic for superovulation is a challenge in animal science. Since red blood cells can be structurally altered by superovulation protocols, the use of investigative techniques, such as morphological high-resolution atomic force microscopy (AFM), can be regarded as an innovative way for high resolution in order to evaluate and diagnose cows receiving superovulation protocols. The aim of this study was to assess possible changes in structural characteristics of heifer erythrocytes allowing a rapid diagnostic test using AFM. We selected 22 cycling Nellore heifers, the sample was divided randomly into three groups, control group, SOV and SOV-LH. The entire sample passed through the three treatments, called cross-over, and each treatment began after 30 days. Blood collection was carried out in D12 during the time of follicular aspiration. A smear was prepared with one mL of blood from each sample on the surface of a circular glass coverslip using a glass slide at an angle of about 45°. Image acquisition was done by analyzing the MFA parameters qualitatively and quantitatively. The samples were analyzed for nanorrugosidade Gwyddion through software. Univariate statistical analyses were performed using the one-way ANOVA model and Tukey test with significance level set at 5%, which did not demonstrate significance to distinguish the three groups. The results of linear discriminant analysis using nanoroughness parameters, had confirmed classification of 93% overall for the investigated samples, enabling the enhancement of this strategy to future use in superovulation strategies for diagnosing.Submitted by Paulo Henrique Vieira dos Santos (paulovs@ucb.br) on 2017-06-07T17:40:57Z No. of bitstreams: 1 KarineMeiradeOliveiraTCCGraduação2010.pdf: 1239193 bytes, checksum: acd8e638d24ea81bc322374fc12c11c3 (MD5)Approved for entry into archive by Sara Ribeiro (sara.ribeiro@ucb.br) on 2017-06-09T17:10:42Z (GMT) No. of bitstreams: 1 KarineMeiradeOliveiraTCCGraduação2010.pdf: 1239193 bytes, checksum: acd8e638d24ea81bc322374fc12c11c3 (MD5)Made available in DSpace on 2017-06-09T17:10:42Z (GMT). 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The superovulation technique in cattle has been developed and improved in order to enhance the reproductive efficiency, maximizing reproduction of genetically superior animals. The superovulatory treatment aims to neutralize the effects of follicular dominance which is related to the divergence of growth between the larger and second largest follicle, avoiding the follicular differences and allowing multiple follicles to acquire physiological characteristics similar to those of the dominant follicle. When an entire protocol in finished, the oocytes recovery occurs, and the aspiration is necessary to monitor through an ultrasound which sometimes leads to false results, in other words, when the heifer does not reach the superovulation. Therefore, the development of alternative diagnostic for superovulation is a challenge in animal science. Since red blood cells can be structurally altered by superovulation protocols, the use of investigative techniques, such as morphological high-resolution atomic force microscopy (AFM), can be regarded as an innovative way for high resolution in order to evaluate and diagnose cows receiving superovulation protocols. The aim of this study was to assess possible changes in structural characteristics of heifer erythrocytes allowing a rapid diagnostic test using AFM. We selected 22 cycling Nellore heifers, the sample was divided randomly into three groups, control group, SOV and SOV-LH. The entire sample passed through the three treatments, called cross-over, and each treatment began after 30 days. Blood collection was carried out in D12 during the time of follicular aspiration. A smear was prepared with one mL of blood from each sample on the surface of a circular glass coverslip using a glass slide at an angle of about 45°. Image acquisition was done by analyzing the MFA parameters qualitatively and quantitatively. The samples were analyzed for nanorrugosidade Gwyddion through software. Univariate statistical analyses were performed using the one-way ANOVA model and Tukey test with significance level set at 5%, which did not demonstrate significance to distinguish the three groups. The results of linear discriminant analysis using nanoroughness parameters, had confirmed classification of 93% overall for the investigated samples, enabling the enhancement of this strategy to future use in superovulation strategies for diagnosing.
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