Efeitos da dexametasona sobre o desenvolvimento, viabilidade e ultraestrutura de folículos secundários bovinos e ovinos cultivados in vitro

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Barroso, Pedro Alves Aguiar
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da Universidade Federal do Ceará (UFC)
Texto Completo: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/47731
Resumo: The aim of this study was to evaluate the effects of different dexamethasone concentrations on development, viability, antrum formation and morphological integrity in in vitro bovine secondary follicles for 18 days. For this purpose, bovine ovaries were obtained from a local slaughterhouse under aseptic conditions already standardized. In the laboratory, secondary follicles approximately 150-200µm in diameter were isolated and intended for in vitro culture in TCM-199 + drops alone or supplemented with different concentrations of dexamethasone (1, 10, 100 and 1000ng / mL). At the end of the cultivation period, the cultured follicles were destined to evaluate the viability with the calcein-AM dyes (viable) and homodimer ethidium (not viable), as well as to evaluate the follicular diameters and antrum formation on days 0, 6, 12 and 18. In addition, before and after in vitro culture, the follicles were fixed for histological and ultrastructural analysis. Follicular growth data were submitted to ANOVA, followed by the T test, while for the analysis of follicular viability and antrum formation, the Chi-square test was used (p <0.05). The follicles cultivated in all dexamethasone treatments showed significant growth, but only those follicles cultivated with 1ng / mL and 1000ng / mL showed growth up to 12 days of cultivation, but there was no significant difference between treatments. Cultivated follicles showed antral cavity formation at the end of the cultivation period. The follicles cultured in the presence of dexamethasone were green (calcein), indicating viability. Morphology and ultrastructure showed that dexamethasone-grown follicles had preserved ultrastructure. However, oocytes from follicles cultured with 10, 100 or 1000ng / mL dexamethasone had signs of degeneration. It can be concluded that in vitro cultured follicles in the presence of dexamethasone showed in vitro growth, as well as maintenance of viability and follicular ultrastructure.
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At the end of the cultivation period, the cultured follicles were destined to evaluate the viability with the calcein-AM dyes (viable) and homodimer ethidium (not viable), as well as to evaluate the follicular diameters and antrum formation on days 0, 6, 12 and 18. In addition, before and after in vitro culture, the follicles were fixed for histological and ultrastructural analysis. Follicular growth data were submitted to ANOVA, followed by the T test, while for the analysis of follicular viability and antrum formation, the Chi-square test was used (p <0.05). The follicles cultivated in all dexamethasone treatments showed significant growth, but only those follicles cultivated with 1ng / mL and 1000ng / mL showed growth up to 12 days of cultivation, but there was no significant difference between treatments. Cultivated follicles showed antral cavity formation at the end of the cultivation period. The follicles cultured in the presence of dexamethasone were green (calcein), indicating viability. Morphology and ultrastructure showed that dexamethasone-grown follicles had preserved ultrastructure. However, oocytes from follicles cultured with 10, 100 or 1000ng / mL dexamethasone had signs of degeneration. It can be concluded that in vitro cultured follicles in the presence of dexamethasone showed in vitro growth, as well as maintenance of viability and follicular ultrastructure.O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos de diferentes concentrações da dexametasona sobre o desenvolvimento, viabilidade, formação de antro e integridade morfológica em folículos secundários bovinos cultivados in vitro por 18 dias. Para este propósito, os ovários bovinos foram obtidos em abatedouro local, em condições assépticas já padronizadas. No laboratório, os folículos secundários com aproximadamente 150-200µm de diâmetro foram isolados e destinados ao cultivo in vitro em gotas de TCM-199+ sozinho ou suplementado com diferentes concentrações de dexametasona (1, 10, 100 e 1000ng/mL). Ao final do período de cultivo, os folículos cultivados foram destinados à avaliação da viabilidade com os corantes calceína-AM (viáveis) e etídio homodímero (não viáveis), bem como avaliação dos diâmetros foliculares e formação de antro nos dias 0, 6, 12 e 18. Além disso, antes e após cultivo in vitro, os folículos foram fixados para análises histológica e ultraestrutural. Os dados do crescimento folicular foram submetidos ANOVA, seguido do teste T, enquanto para a análise da viabilidade folicular e formação de antro foi utilizado o teste Qui-quadrado (p<0,05). Os folículos cultivados em todos os tratamentos com dexametasona apresentaram crescimento significativo, mas somente aqueles cultivados com 1ng / mL e 1000ng / mL apresentaram crescimento até 12 dias de cultivo, porém, não houve diferença significativa entre os tratamentos. Folículos cultivados mostraram formação de cavidade antral ao final do período de cultivo. Os folículos cultivados na presença de dexametasona apresentaram coloração verde (calceína), indicando viabilidade. A morfologia e a ultraestrutura mostraram que os folículos cultivados com dexametasona tinham a ultraestrutura preservada. No entanto, oócitos de folículos cultivados com 10, 100 ou 1000ng / mL de dexametasona tinham sinais de degeneração. Pode-se concluir que folículos cultivados in vitro na presença de dexametasona apresentaram crescimento in vitro, bem como manutenção da viabilidade e ultraestrutura folicular.Biblioteca da UFCSilva, José Roberto VianaBarroso, Pedro Alves Aguiar2019-11-13T19:45:59Z2019-11-13T19:45:59Z2019-02-27info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfBARROSO, P.A.A. Efeitos da dexametasona sobre o desenvolvimento, viabilidade e ultraestrutura de folículos secundários bovinos cultivados in vitro. 2019. 68 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Campus de Sobral, Universidade Federal do Ceará, Sobral, 2019.http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/47731porreponame:Repositório Institucional da Universidade Federal do Ceará (UFC)instname:Universidade Federal do Ceará (UFC)instacron:UFCinfo:eu-repo/semantics/openAccess2022-02-25T16:56:35Zoai:repositorio.ufc.br:riufc/47731Repositório InstitucionalPUBhttp://www.repositorio.ufc.br/ri-oai/requestbu@ufc.br || repositorio@ufc.bropendoar:2024-09-11T18:30:31.514190Repositório Institucional da Universidade Federal do Ceará (UFC) - Universidade Federal do Ceará (UFC)false
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