Caracterização in situ dos orientadores de axônio por repulsão (RGMs) na musculatura esquelética, e caracterização funcional do membro A (RGMa) durante a miogênese em camundongos

• Autor(a) principal: Aline Fagundes Martins
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-A3AQV9
• topic: Músculo esquelético; C2C12; Orientador de axônio; Células primárias; Proteínas sarcomérircas; RGM; Biologia celular

Orientadores de axônio por repulsão (RGMs) são moléculas que atuam como pistas negativas para orientar o crescimento axonal durante o desenvolvimento embrionário, permitindo a correta inervação dos tecidos e órgãos. A família RGM é composta por quatro membros: RGMa, RGMb, RGMc e RGMd. Novas evidências têm sugerido possíveis papéis para estas RGMs durante o desenvolvimento e manutenção da musculatura esquelética em vertebrados. RGMa e RGMb foram encontrados na região dos somitos onde se originam os precursores miogênicos e células satélites. Evidências também sugerem a presença dessas moléculas nas células musculares esqueléticas de camundongos adultos. No presente estudo, procuramos (1) determinar a localização de RGMa, RGMb e RGMc nas células musculares esqueléticas de camundongos adultos; e (2) investigar os efeitos da super-expressão e knockdown de RGMa nas células musculares esqueléticas in vitro. RGMa, RGMb e RGMc foram encontradas no sarcolema. RGMa também foi observada no sarcoplasma, onde apresentou um padrão estriado de marcação, semelhante às proteínas sarcoméricas. Foi possível co-localizar RGMa com proteínas sarcoplasmáticas conhecidas, sugerindo que este orientador de axônio atue como uma proteína sarcoplasmática. Ensaios de western blot revelaram a presença de dois peptídeos para RGMa em amostras de músculo esquelético adulto, um de 60 e outro de 33 kDa. A função biológica de RGMa em células musculares esqueléticas foi investigada em células da linhagem C2C12 e mioblastos primários. A super-expressão de RGMa in vitro promoveu o aparecimento de células mais largas, hipertróficas, em sua maioria miotubos; enquanto o knockdown de RGMa resultou em células menores, atróficas, com morfologia típica de mioblastos indiferenciados. O knockdown de RGMa bloqueou a formação de miotubos, uma vez que, interferiu na fusão dos mioblastos. Nossos resultados são os primeiros a mostrar uma molécula orientadora de axônio como uma proteína sarcoplasmática e a incluir RGMa nos sistemas que regulam o tamanho e a diferenciação da célula muscular esquelética in vitro.