Investigação da atividade antitumoral de lipossomas pH-sensíveis de circulação prolongada contendo doxorrubicina em modelo animal experimental

• Autor(a) principal: Fernanda Alves Boratto
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/33810
• topic: Doxorrubicina; Lipossomas pH-sensíveis; Câncer de mama; Atividade antitumoral

O câncer de mama é o tipo de câncer que mais acomete mulheres em todo o mundo, tanto em países em desenvolvimento quanto em países desenvolvidos, sendo responsável por 20% dos casos novos de câncer a cada ano. As antraciclinas, particularmente a doxorrubicina, desempenham um papel importante no tratamento do câncer de mama. Entretanto, a elevada toxicidade, principalmente a cardiotoxicidade, e a baixa penetração em tumores sólidos são as principais causas de sua limitação como agente terapêutico. A encapsulação da doxorrubicina em lipossomas de circulação prolongada demonstrou benefícios, como a redução na incidência de efeitos adversos, dentre eles a toxicidade cardíaca, culminando no desenvolvimento da primeira formulação lipossomal para o tratamento do câncer, o Doxil®, aprovado pelo FDA desde 1995. Apesar das vantagens, os lipossomas de circulação prolongada apresentam uma baixa taxa de liberação do fármaco encapsulado e/ou dificuldade para fundir com a membrana endossomal após a internalização celular. Esses fatores reduzem a concentração intracitoplasmática do fármaco, o que pode comprometer a eficácia terapêutica. Diante disso, formulações lipossomais pH-sensíveis contendo agentes antitumorais têm sido desenvolvidas para explorar a acidificação endossomal, que leva à desestabilização das membranas lipossomais seguida da liberação de seu conteúdo no meio intracitoplasmático. No presente trabalho, foram desenvolvidos e caracterizados lipossomas pH-sensíveis de circulação prolongada contendo doxorrubicina (SpHL-DXR) para avaliação da atividade citotóxica contra a linhagem de câncer de mama murino 4T1, assim como a atividade antitumoral em um modelo de tumor xenográfico mamário em camundongos. A formulação foi caracterizada fisico-quimicamente por análises de diâmetro médio, índice de polidispersão (IP), potencial zeta e teor de encapsulação. Foram obtidos valores de diâmetro médio inferior a 200 nm, IP menor que 0,2 e potencial zeta próximo a neutralidade, permitindo a aplicação dessa formulação para os estudos in vivo. Estudo de estabilidade de armazenamento dos lipossomas brancos (isentos de doxorrubicina) a 4°C comprovou a manutenção das características físico-químicas da formulação por até seis meses, sugerindo a possibilidade da produção de um kit contendo, separadamente, a formulação branca e a doxorrubicina liofilizada, para aplicação em uso clínico. Os estudos de pH-sensibilidade demonstraram responsividade dos lipossomas a alterações de pH. A citotoxicidade dos SpHL-DXR contra células da linhagem 4T1 foi avaliada por meio do ensaio de metabolização do MTT. O valor de IC50 obtido após o tratamento com SpHL-DXR foi igual a 1563 nM. Esse valor corresponde a uma redução de 35% em relação ao tratamento com a DXR livre (IC50 igual a 2413 nM), indicando melhora da citotoxicidade da DXR quando encapsulada nessa formulação. Para o estudo de atividade antitumoral, camundongos portadores de tumor xenográfico mamário foram tratados com tampão HEPES-salina pH 7,4 (grupo controle), lipossomas pH-sensíveis de circulação prolongada isentos de doxorrubicina (SpHL brancos), solução de doxorrubicina, formulação lipossomal semelhante ao Doxil® ou SpHL-DXR (dose igual a 4 mg de doxorrubicina.Kg-1) por via endovenosa a cada dois dias, totalizando quatro administrações. Os seguintes parâmetros foram avaliados durante o período de tratamento: volume tumoral e suas características histológicas, peso corporal, peso do tumor e avaliação histológica de órgãos de interesse (fígado, baço, rim, pulmão, osso e coração). Em termos do volume tumoral, o tratamento com SpHL-DXR foi capaz de estabilizar o crescimento tumoral, ao contrário do tratamento com solução de doxorrubicina. Quanto a avaliação histológica, foram observadas maiores áreas de necrose, com células em cariólise e cariorrexe, nos tumores tratados com SpHL-DXR, enquanto os demais grupos apresentaram áreas de necrose menos extensas e maiores áreas compostas por células viáveis. Os órgãos analisados histologicamente (fígado, baço, pulmão, rim, osso e coração) do grupo tratado com SpHL-DXR não apresentaram alterações na arquitetura celular, indicando ausência de toxicidade.