Análises proteômicas, anti-venômicas e isolamento de novas proteínas com atividade citotóxicas de venenos elapídicos

• Autor(a) principal: Paula Henriques Cruz Ciscotto
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-B9JFX2
• topic: Bioquímica; Venenos de Serpentes; Antiveneno; Bioquímica e imunologia; Proteômica

Com o desenvolvimento tecnológico, áreas da pesquisa como a proteômica, análises anti-venômicas e prospecção de novas proteínas com atividade biológica em venenenos de serpentes vem crescendo nos últimos anos. Estudos de venenos raros e de difícil obtenção, como os venenos de serpentes do gênero Micrurus começaram a ser realizados com maior frequencia. O gênero Micrurus (cobra coral) é o principal representante da família Elapidae nas Américas e compreende 61 espécies distribuídas do Sul dos Estados Unidos ao sul da América do Sul. No envenenamento por espécies deste gênero são observados sintomas neurotóxicos devidos a um progressivo bloqueio da transmissão neuromuscular, o que pode levar a vítima à morte por paralisia muscular e parada respiratória. Apesar da sua alta toxicidade poucas informações existem acerca da caracterização bioquímica e farmacológica desse veneno. No presente trabalho, em um primeiro momento, análises proteômicas foram realizadas objetivando o melhor entendimento da composição dos venenos das espécies M. frontalis, M. ibiboboca e M. lemniscatus. Nos três venenos investigados, proteínas com massa moleculares entre 6 e 8 kDa e 12 e 14 kDa mostraram-se mais abundantes. Por meio de sequenciamento Nterminal de proteinas purificadas, seqüenciamento por espectrometria de massa (MS/MS) de peptídeos trípticos de eletroforese bidimensional e pesquisa de similaridade em bancos de dados, foi verificado que os venenos são compostos de proteínas similares à: neurotoxinas de cadeia curta e de cadeia longa, weak neurotoxinas, venom protein E2, frontoxina III, precursores de lectina tipo C, PLA2, LAO, metaloproteases e â-bungarotoxina. Ainda, forma relatados pela primeira vez, a sequência N-terminal de sete proteínas purificadas do veneno de M. lemniscatus, similares à 3FTx, PLA2 e inibidores de proteases do tipo-kunitz já descritas em venenos de outras Micrurus e Elapídeos. Em um segundo momento, a atividade anti-venômica foi investigada por meio da reação cruzada entre diferentes venenos de Micrurus e antivenenos mono e polivalente, por meio de eletroforese bidimensional e immunoblotting. O antiveneno polivalente anti-Elapídico apresentou maior grau de reatividade cruzada com os venenos de M. frontalis, M. ibiboboca, M. lemniscatus e de espécimes peruanos de M. spixii, sendo este último usado como um ponto externo, exemplificando um veneno que não é comumente encontrado no Brasil. Ainda, o anti M. corallinus reagiu fracamente com as proteínas dos venenos testados, tendo o anti-M. ibiboboca mostrado melhor reação quando comparado ao anti-M.corallinus. As proteínas mais imunogências dos venenos pertencem são similares a 3FTx, PLA2, âbungarotoxin, venom protein E2, frontoxina III, LAO e proteínas tipo lectina tipo C. As implicações destes resultados para a produção de antivenenos contra Micrurus são discutidas. Ainda, como terceiro passo de investigação, duas proteínas da família das 3FTx, com massas moleculares de 6435,4 Da e 6504,6 Da foram purificadas à partir do veneno de M. lemniscatus e tiveram sua toxicidade ensaiada contra células de parasitas e de mamíferos. Ambas as proteínas foram tóxicas para formas promastigotas de L. (L). amazonensis, apresentando uma porcentagem de morte de 49% e 39% dos protozoários, respectivamente, na concentração de 50 µg/mL. Entretanto, as mesmas proteínas mostraram-se tóxicas para macrófagos isolados de camundongos.