A expressão de SOX3 modula as vias de apoptose e transição epitélio-mesênquima em carcinoma ductal invasivo de mama humano

• Autor(a) principal: Felipe Henrique de Souza Silva
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/45902
• topic: Câncer de mama; Fatores de Transcrição; SOX3; Apoptose; MDA-MB-231; Patologia; Neoplasias da Mama; Fatores de Transcrição; Fatores de Transcrição SOXB1; Apoptose

O câncer de mama é uma das doenças que mais matam mulheres em todo o mundo. Por ser considerado uma doença complexa e com comportamento dinâmico, é necessário a busca de novos marcadores tumorais e de alvos terapêuticos. As proteínas que atuam como fatores de transcrição tem sido alvo de estudo nas neoplasias pelo seu importante papel na transcrição de genes que codificam proteínas oncogênicas ou supressoras tumorais. Dentre os fatores de transcrição importantes no destino da diferenciação celular e do processo de desenvolvimento dos órgãos e tecidos, as proteínas da família SOX tem se destacado como alvo no estudo das neoplasias, dentre elas a proteína SOX2 e SOX14, membros do mesmo subgrupo da proteína SOX3, ainda pouco estudada. Com o objetivo de estudar o papel da proteína SOX3 na regulação da apoptose e da transição epitéliomesênquima (TEM) em neoplasias mamarias, a linhagem celular MDAMB213, proveniente de carcinoma ductal invasivo de mama, foi selecionada como modelo experimental por não expressar a proteína SOX3, e apresentar um fenótipo mais agressivo (Triplonegativo). Portanto, para cumprir o objetivo do presente trabalho, a região que codifica a proteína SOX3 humana foi subclonada no vetor de expressão pEF1/MycHis usando uma sequência SOX3 amplificada a partir de DNA genômico humano. As células MDAMB231 foram cultivadas e transfectadas com o vetor pEF1/MycHis/ SOX3, e como controle foram utilizadas células sem tratamento e células transfectadas com vetor vazio pEF1/MycHis. Após 24 horas da transfecção, foi avaliado a citotoxicidade por teste de viabilidadeMTT, a porcentagem de células em apoptose por citometria de fluxo usando o protocolo de Anexina VFITC/ PI, e a expressão dos genes envolvidos na apoptose e na TEM por qPCR: SOX3, CASP3, CASP8, CASP9, BAX e BCL2, ECAD, NCAD, SNAIL, ZEB1 e ZEB2. Os resultados indicaram uma redução de 55% da viabilidade das células transfectadas com pEF1/MycHis/ SOX3, em relação aos seus controles, corroborando com os resultados da porcentagem de apoptose por citometria de fluxo nas células transfectadas com pEF1/MycHis/ SOX3 (52%) quando comparados ao controle não transfectado (10%) e ao vetor vazio (13%). Os resultados da qPCR indicaram maior expressão gênica de CASP3 (3,26 vezes), CASP8 (2,24 vezes), CASP9 (18,54 vezes), BAX (4,11 vezes) e, menor expressão gênica de BCL2 (0,40 vezes) em comparação com o controle não transfectado. Já a avaliação dos genes relacionados a TEM demonstraram menor expressão de mRNA de NCAD (0,06 vezes), SNAIL (0,18 vezes), ZEB1 (0,15 vezes), ZEB2 (0,11 vezes) e uma maior expressão de ECAD (27 vezes). Deste modo, os resultados do presente estudo suportam a hipótese de que SOX3 é um fator de transcrição com envolvimento na regulação dos genes próapoptóticos e do fenótipo epitelial, com possível ação supressora de tumor, e a perda da sua expressão é um indicativo de resistência a apoptose e de favorecimento da TEM. Futuros estudos funcionais, assim como a investigação da expressão dessa proteína em tecidos de tumor de mama, correlacionados as características clínicas e de prognóstico tumoral, devem ser realizados para melhor elucidar o papel dessa proteína no câncer de mama.