Purificação e caracterização biológica (estrutural, antibacteriana, antiparasitária, hemolítica e antigênica) de componentes do veneno da serpente Bothrops jararaca

• Autor(a) principal: Paula Henriques Cruz Ciscotto
• Data de Publicação: 2005
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8TFQPD
• topic: Bioquímica e Imunologia; Bioquímica; Jararaca (Cobra) Veneno

Os venenos de animais peçonhentos constituem rica fonte de informação para os pesquisadores, por serem compostos de substâncias biologicamente ativas. Dentre essas substâncias destacam-se as proteínas e os peptídeos que, ao serem caracterizados, possibilitam o seu entendimento funcional, além de promover uma possível aplicabilidade biotecnológica. O presente trabalho teve início após a observação que entre diferentes venenos de animais peçonhentos testados quanto à capacidade antibacteriana, os das serpentes do gênero Bothrops apresentaram significante atividade, principalmente B. jararaca. O veneno de B. jararaca mostrou-se capaz de inibir o crescimento de bactérias gram-positivas e gram-negativas, sendo então fracionado pela combinação sucessiva das cromatografias de gel filtração, troca aniônica e afinidade à heparina, obtendo-se ao final dos processos uma fração com atividade antibacteriana. A atividade antibacteriana está diretamente ligada a atividade L-aminoácido oxidase. A fração purificada HTP1 e o veneno bruto apresentaram também atividade antiparasitária, matando formas promastigotas de Leishmania amazonensis e atividade hemolítica, promovendo a lise parcial de hemácias de cavalo. As atividades biológicas de HTP1 foram inibidas pela adição de catalase, um antioxidante, o que leva a sugerir a ligação direta do peróxido de hidrogênio nestas atividades. Após cromatografia de troca aniônica foi purificada uma proteína heterodimérica, denominada proteína P8 com massa molecular de 30260,87 Da observada por espectrômetro de massa. Após redução das ligações dissulfetos esta apresentou duas subunidades com 15,8 kDa e 14,4 kDa. A seqüência de aminoácidos da região N-terminal da subunidade P8a foi DCPSGWSSYEGNCYKFFQQK, e da subunidade P8b foi XCPPDWSSYEGHCYRFFKEE. As subunidades da proteína P8 apresentaram alto grau de identidade com proteínas tipo-lectina tipo-C. A atividade antigênica da proteína P8 foi caracterizada e foi observado que a potência de antivenenos botrópicos se correlacionou com títulos de anticorpos medidos por ELISA, quando esta proteína foi imobilizada nas placas.