Caracterização e purificação parcial de substância antagonista produzida por Bacteroides fragilis isolado de paciente com infecção intra-abdominal

• Autor(a) principal: Marcela Nascimento Pinheiro Braga
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/35508
• topic: Bacteroides; Parabacteroides; Substâncias antagonistas; Microbiota intestinal; Infecção intra-abdominal; Microbiologia; Bacteroides fragilis; Microbioma gastrointestinal; Infecções

A microbiota indígena dos seres humanos é extremamente rica e diversificada, merecendo especial destaque a microbiota intestinal. Como constituinte desta microbiota, cita-se o gênero Bacteroides, cujos membros são bastonetes Gram negativos, anaeróbios obrigatórios, anfibiontes, associados à etiopatogenia de doenças infecciosas importantes, como, por exemplo, infecções intra-abdominais. Amostras de Bacteroides apresentam a habilidade de sintetizar substâncias antagonistas que desempenham função ecológica, principalmente, em habitats densamente colonizados, conferindo vantagem competitiva às amostras produtoras. O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade de síntese de substâncias antagonistas por 40 amostras de Bacteroides e Parabacteroides isoladas de pacientes com infecções intra-abdominais. A expressão de antagonismo foi avaliada pelo método de difusão em sobrecamada, empregando, como reveladoras, além das amostras teste, 42 amostras de referência de bactérias Gram negativas e Gram positivas. Posteriormente, uma amostra produtora (Bacteroides fragilis) foi empregada para extração, purificação e caracterização parcial da substância antimicrobiana detectada. Como reveladoras, foram empregadas, nesta etapa, amostras de Bacteroides ovatus e Bacteroides caccae. A amostra produtora foi submetida a extração proteica, detectando-se atividade do extrato intracelular precipitado com (NH4)2SO4 nas concentrações de 30% (C30) e 50% (C50). Os extratos brutos C30 e C50 foram inativados por proteases e altas temperaturas e mantiveram-se ativos após exposição a solventes orgânicos e uma ampla faixa de pH. Ambas as frações apresentaram atividade antagonista de natureza bacteriostática. O extrato C50, por se mostrar mais ativo, foi submetido à cromatografia de troca iônica, gel filtração e de fase reversa, seguindo esta ordem. A fração 2C, oriunda da cromatografia de fase reversa manteve-se ativa. A espectrometria de massas, a partir da fração 2C, apresentou íons de aproximadamente 1300 Da, que geraram um sinal mais intenso. Foi realizada busca por similaridade entre fragmentos sequenciados e proteínas descritas nos bancos de dados BLASTP e Antimicrobial Peptide Database. A sequência do fragmento obtido por cromatografia de fase reversa resultou em identidade de 100% com uma proteína de secreção do tipo VII (BLASTP). Em conjunto, os resultados indicam a produção de substância antagonista pela amostra de B. fragilis em estudo. É plausível supor que as mesmas desempenhem papel relevante nas relações interbacterianas, como fator de virulência, em um ambiente complexo como o de uma infecção intra-abdominal.