Caracterização da ribonucleoproteína RBP42 no parasito Trypanosoma cruzi sob condições de estresse

• Autor(a) principal: Daniela de Laet Souza
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/33622
• topic: Tryapanosoma cruzi; RBP42; Estresse genotóxico; Ribonucleoproteína; Radiação gama; Benzonidazol; Bioquímica; Ribonucleoproteínas; Trypanosoma cruzi

Proteínas ligantes de RNA (RBPs) são componentes essenciais na regulação da expressão gênica. A interação entre RBPs e seus mRNA alvos formam os complexos ribonucleoproteicos que ditam o destino dos transcritos e podem se agregar em grânulos citoplasmáticos microscopicamente visíveis em resposta a estímulos capazes de causar a parada súbita da tradução. No Trypanosoma cruzi existe um grande repertório de grânulos, que podem integrar os mecanismos que conferem a esse parasito a sua notável resistência a diferentes tipos de estresse. A ribonucleoproteína RBP42, estudada frequentemente nos tripanosomatídeos, foi descrita pela primeira vez no Trypanosoma brucei como sendo uma proteína citoplasmática essencial para a viabilidade celular. Nesse trabalho realizamos a caracterização da proteína RBP42 do T. cruzi CL Brener (TcbRBP42). Inicialmente, as características dos genes e da proteína TcbRBP42 foram estudadas in silico. As predições de estrutura secundária e buscas por domínios conservados mostraram que a proteína TcbRBP42 apresenta uma estrutura modular composta por dois domínios estruturados, NTF2-like e RRM, ligados entre si por uma longa região central desordenada e enriquecida em sequências de baixa complexidade. Essas características também foram encontradas em seus ortólogos presentes em outros cinetoplastídeos. Adicionalmente, essa proteína é codificada por apenas dois alelos no genoma do parasito. A proteína TcbRBP42 também foi caracterizada no contexto do estresse celular induzido pela radiação gama e pelo benzonidazol, dois agentes aos quais esse parasito apresenta resistência. Para fins de detecção, uma versão recombinante dessa proteína marcada com uma cauda de histidina (rTcbRBP42) foi expressa em epimastigotas. A expressão de rTcbRBP42 não alterou o padrão de crescimento das epimastigotas mantidas em condições normais de cultivo ou submetidas aos tratamentos com radiação gama e benzonidazol. A parada de crescimento ocasionada pelo estresse foi muito similar em epimastigotas expressoras de rTcbRBP42 e wild type. Ensaios de imunofluorescência mostraram que o tratamento dos parasitos com esses agentes promove a distribuição diferencial de rTcbRBP42 que se acumula em estruturas citoplasmáticas granulares, cujas características variam de acordo com o tipo de estresse aplicado. A marcação dos RNAs sintetizados após a indução de estresse também revelou o efeito diferencial dos tratamentos na distribuição celular desses RNAs. Após a irradiação, os RNAs recém-sintetizados não formam grânulos; em vez disso, estes são transportados e se espalham por todo o citoplasma dos parasitos. Em contrapartida, foi observada a agregação desses em focos citoplasmáticos após exposição ao benzonidazol. Esses focos não foram colocalizados com aqueles de rTcbRBP42, o que sugere que os RNAs presentes nessas estruturas provavelmente não são alvos dessa proteína. Em conjunto, os dados sugerem que TcbRBP42 é uma ribonucleoproteína capaz de formar grânulos em resposta a diferentes condições de estresse. Esses grânulos provavelmente variam em composição de acordo com o estresse aplicado e podem ser parte dos muitos mecanismos que permitem a sobrevivência do T. cruzi aos estresses causados pela radiação gama e pelo benzonidazol.