Expressão heteróloga e purificação da tityustoxina: obtenção da proteína recombinante Ts3 do escorpião Tityus serrulatus

• Autor(a) principal: Anderson Oliveira do Carmo
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8FNGWJ
• topic: Genética; Escorpião Veneno; Tityus serrulatus; Toxinas; Proteínas recombinantes; Genética; Sorologia

O escorpião Tityus serrulatus é a espécie brasileira que possui o veneno mais tóxico e causa elevado número de acidentes, principalmente em áreas urbanas, podendo levar a óbitos crianças e idosos. O tratamento dos casos mais graves consiste em soroterapia, porém este método possui alguns problemas como a obtenção de veneno bruto, manutenção dos cavalos imunizados e baixa sobrevida destes após imunização. Uma alternativa para a solução destes problemas é a expressão heteróloga das principais toxinas em Escherichia coli. Desta maneira, objetivou-se a expressão heteróloga da toxina Ts3 de T. serrulatus sem toxicidade para a produção de soro. A sequência nucleotídica da Ts3 madura foi amplificada e clonada nos vetores de expressão bacteriana pET26b e pET32c. Após a clonagem, os vetores pET26/Ts3 pET32/Ts3e foram expressos em E. coli Origami (DE3), C41 (DE3) e C43 (De3) e a Ts3 recombinante expressada pelo vetor pET26b/Ts3 foi purificada através de uma resina de níquel. Após a purificação, os coelhos foram imunizados com a Ts3 recombinante, após seis doses de Ts3 recombinante foi aplicada uma dose de veneno bruto de T. serrulatus. O soro anti-Ts3 recombinante foi caracterizado por ELISA e SPOT. A Ts3 recombinante não apresentou nenhuma atividade farmacológica em injeção subcutânea em camundongos. O soro anti-Ts3 recombinante apresentou reconhecimento razoável ao veneno bruto por ELISA e o soro anti-Ts3 recombinante com apenas uma dose de veneno obteve aumento de seu reconhecimento. O SPOT revelou maior presença de anticorpos que reconhecem a porção C-terminal desta toxina. O soro anti-Ts3 recombinante não foi capaz de neutralizar o veneno, porém o soro anti-Ts3 recombinante com uma dose de veneno neutralizou 2DL50. O baixo desempenho na neutralização pode estar relacionado a uma conformação inadequada da Ts3 recombinante que não gerou a produção de anticorpos neutralizantes. O uso de toxinas recombinantes na produção de soro necessita de aperfeiçoamento, porém os resultados obtidos mostram que este é um método promissor para a produção de soro antiescorpiônico.