Avaliação do papel de genes imunorreguladores (B18R, D9R e D10R) em infecções causadas por amostras de Vaccinia virus: utilização de vírus recombinantes como ferramenta de análise

• Autor(a) principal: Lorena Falabella Daher de Freitas
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/41324
• topic: Orthopoxvirus; MVA; Genes imunomoduladores; Vetor vacinal; Microbiologia; Orthopoxvirus; Vírus Vaccinia; Imunomodulação

Os Orthopoxvirus fazem parte da família Poxviridae que compreende vírus grandes e complexos que possuem um genoma de DNA linear de dupla fita e se multiplicam no citoplasma da célula hospedeira. Para escapar da resposta imune do hospedeiro, os OPXV possuem genes que codificam proteínas de evasão imune. Esses vírus possuem como alvo muitos mediadores da imunidade inata incluindo IFNs, TNFs, interleucinas (IL), sistema do complemento e quimiocinas, além disso, interferem em várias vias de sinalização celular. O vírus MVA, um OPXV, foi obtido através de mais de 500 passagens sucessivas do vírus corioalantóide Vaccinia Ankara (CVA) em culturas de fibroblasto de embrião de galinha (CEF). Após essas passagens o MVA perdeu cerca de 15% do seu genoma parental e se tornou incapaz de se multiplicar produtivamente na maioria das linhagens celulares de mamíferos e por isso ele é um excelente candidato a vetor vacinal. O delineamento dos genes imunomoduladores que estão ausentes na amostra MVA é essencial para o entendimento, de uma forma global, da interação dos VACV com a resposta antiviral do hospedeiro. Pois, mesmo sabendo que a segurança e eficácia do MVA como vetor vacinal são bem estabelecidas, a base genética que define essas características ainda não é bem entendida. Como o MVA foi gerado a partir de um processo de atenuação em que os genes foram deletados de forma aleatória, ao se estudar esses genes isoladamente podemos entender quais papeis exercem na virulência da amostra viral e utilizar esses conhecimentos para produzir, de uma maneira mais racional, novos vetores virais através da deleção de genes específicos. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar o papel dos genes B18R (receptor solúvel dos IFN tipo I), D9R e D10R (enzimas que removem o cap 5’ do mRNA) através da caracterização “in vitro” de diferentes construções dos vírus Western Reserve (WR) e MVA expressando ou não esses genes, além de comparar a imunogenicidade desses vírus em modelo murino. A inativação dos sítios catalíticos das enzimas D9 e D10 do vírus MVA, além de atrasar a transição entre os estágios precoces e tardios do ciclo viral e a interrupção da síntese proteica celular, causa um acúmulo de dsRNA principalmente nas células BS-C-1 infectadas pelo vírus duplo mutante. Esse acúmulo é capaz de ativar vias de sinalização celular que vão desencadear a resposta antiviral interrompendo principalmente a síntese de proteínas na célula infectada e estimulando a produção de IFN tipo I. Provavelmente o MVAD9muD10mu construído neste trabalho é mais imunogênico que a amostra original, sendo, portanto, um bom candidato para vetor vacinal. Quanto ao gene B18R nenhuma alteração de virulência ou fenótipo de placas foi notada nas amostras MVA contendo ou não o gene. Além disso, a inserção do gene B18R também não causou alterações significativas na ativação das células dendríticas e dos linfócitos T e B. Com relação ao vírus WR a deleção causou uma redução significativa na virulência da amostra WRΔB18 quando comparada a amostra original e dentro dos parâmetros analisados podemos concluir que a ausência da proteína B18 no vírus WR causa uma maior ativação das DC e uma menor ativação de linfócitos B e T.