Estudo do potencial cardiomiogênico de células-tronco mesenquimais

• Autor(a) principal: Juliana Lott de Carvalho
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-ACFELH
• topic: Diferenciação in vitro; Células-tronco mesenquimais; Cardiomiogênese; Bioquímica

A diferenciação de células-tronco mesenquimais em osteócitos, condrócitos e adipócitos é estabelecida na literatura, porém a diferenciação cardiomiogênica é altamente controversa. Existem autores que defendem a realização da diferenciação cardiomiogênica in vitro, e autores que questionam a reprodutibilidade dos resultados e a falta de ensaios funcionais em alguns trabalhos. Os diversos trabalhos investigam diferentes populações celulares e diferentes técnicas de indução, tornando a comparação entre os resultados impossível. A fim de elucidar conceitos e o potencial cardiomiogênico de células-tronco mesenquimais, o presente trabalho induziu a cardiomiogênese de duas populações de células-tronco mesenquimais derivadas da medula óssea e do tecido adiposo, com a utilização de dois meios cardiomiogênicos descritos na literatura. Os resultados obtidos indicam que as CTM foram responsivas aos estímulos do meio, apresentando fenótipo semelhante ao de cardiomiócitos: as células diminuíram sua proliferação, produção de fosfatase alcalina e colágeno, passaram a expressar fatores de transcrição como Nkx2-5, GATA4, e -MHC, porém em níveis menores do que os apresentados por cardiomiócitos adultos e neonatais. Não obstante, as CTM aproximaram o seu perfil fenotípico ao apresentado por cardiomiócitos: CD45-, CD54baixo, CD73+ ou -, CD90-. Apesar da expressão de CD45 ter aumentado em algumas condições e a expressão de CD90 ter se mantido ao longo do cultivo, nenhum desses resultados é incompatível com o fenótipo cardiomiogênico. As CTM diferenciadas apresentaram -actinina sarcomérica e conexina-43 corretamente, indicando a possibilidade de uma diferenciação funcional. Porém, funcionalmente elas não reproduziram as características de cardiomiócitos isolados in vivo. Experimentos de eletrofisiologia demonstraram que as CTM diferenciadas não apresentaram capacidade de gerar correntes de entrada e saída, essenciais à função cardiomiogênica, e consequentemente, não desenvolveram potenciais de ação quando estimuladas. Os resultados descritos permitem sugerir que as CTM induzidas à seguir a diferenciação cardiomiogênica originaram cardiomiócitos não funcionais in vitro. Pela primeira vez, demonstrou-se que os picos de expressão gênica das CTM diferenciadas não atingiram os níveis apresentados por cardiomiócitos funcionais. O presente trabalho, portanto, evidencia a importância de controles positivos nos experimentos, assim como a utilização de técnicas quantitativas nas análises. Atualmente, a sensibilidade das técnicas utilizadas é extremamente alta, sendo que sinais não relevantes biologicamente podem ser detectados.