Caracterização funcional do fator de transcrição SmZF1 de Schistosoma mansoni por interferência de RNA (RNAi)

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Isadora Oliveira Prata
Data de Publicação: 2016
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AB6QDA
Resumo: A esquistossomose é uma doença causada por parasitos do gênero Schistosoma, sendo uma das mais prevalentes dentre as doenças tropicais negligenciadas. Atualmente, mais de 240 milhões de pessoas no mundo estão infectadas. No Brasil, a esquistossomose é causada pela espécie Schistosoma mansoni. Durante o seu complexo ciclo de vida, o S. mansoni é submetido a diferentes ambientes, onde a regulação da expressão gênica exerce um papel central nas transformações morfológicas e fisiológicas necessárias para o desenvolvimento deste parasito. Nesse contexto, a proteína SmZF1, um fator de transcrição de S. mansoni que contém quatro motivos dedos de zinco do tipo C2H2, representa um alvo em potencial para estudos do controle da expressão gênica associada ao desenvolvimento larval e ao processo reprodutivo em vermes adultos do parasito. Esse projeto teve como objetivo a caracterização funcional da proteína SmZF1, através de interferência de RNA (RNAi), a fim de investigarmos a importância dessa proteína durante o estabelecimento da infecção do hospedeiro vertebrado pelo S. mansoni. Após o cultivo in vitro de esquistossômulos na presença do dsRNA de SmZF1 por sete dias, verificamos que os transcritos de SmZF1 foram silenciados de maneira efetiva e específica, alcançando uma diminuição máxima de ~69% com relação aos esquistossômulos cultivados na ausência de qualquer dsRNA. Além disso, observamos um leve retardo no crescimento dos esquistossômulos após dois dias de tratamento com o dsRNA de SmZF1. Avaliamos ainda a expressão gênica de dois genes que podem ser alvo de regulação por SmZF1 em S. mansoni, Smp_065180 e Smp_030710, e verificamos que o silenciamento desse fator de transcrição não alterou significativamente os níveis dos transcritos de ambos os genes. A infecção de camundongos com esquistossômulos silenciados para os transcritos de SmZF1, quando comparada à infecção do grupo controle, resultou em uma diminuição de ~72% da carga parasitária, além de uma redução de ~70% na carga de ovos depositados nos fígados dos camundongos. O silenciamento dos transcritos de SmZF1 induzido em esquistossômulos foi transiente, uma vez que o mesmo não se manteve nos vermes adultos, derivados dos esquistossômulos transformados. Também não foram observadas alterações nos parâmetros histopatológicos avaliados nos fígados dos camundongos infectados com esquistossômulos silenciados para os transcritos de SmZF1. Os resultados sugerem o envolvimento de SmZF1 no desenvolvimento larval e no estabelecimento da infecção de S. mansoni no hospedeiro vertebrado.
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Nesse contexto, a proteína SmZF1, um fator de transcrição de S. mansoni que contém quatro motivos dedos de zinco do tipo C2H2, representa um alvo em potencial para estudos do controle da expressão gênica associada ao desenvolvimento larval e ao processo reprodutivo em vermes adultos do parasito. Esse projeto teve como objetivo a caracterização funcional da proteína SmZF1, através de interferência de RNA (RNAi), a fim de investigarmos a importância dessa proteína durante o estabelecimento da infecção do hospedeiro vertebrado pelo S. mansoni. Após o cultivo in vitro de esquistossômulos na presença do dsRNA de SmZF1 por sete dias, verificamos que os transcritos de SmZF1 foram silenciados de maneira efetiva e específica, alcançando uma diminuição máxima de ~69% com relação aos esquistossômulos cultivados na ausência de qualquer dsRNA. Além disso, observamos um leve retardo no crescimento dos esquistossômulos após dois dias de tratamento com o dsRNA de SmZF1. Avaliamos ainda a expressão gênica de dois genes que podem ser alvo de regulação por SmZF1 em S. mansoni, Smp_065180 e Smp_030710, e verificamos que o silenciamento desse fator de transcrição não alterou significativamente os níveis dos transcritos de ambos os genes. A infecção de camundongos com esquistossômulos silenciados para os transcritos de SmZF1, quando comparada à infecção do grupo controle, resultou em uma diminuição de ~72% da carga parasitária, além de uma redução de ~70% na carga de ovos depositados nos fígados dos camundongos. O silenciamento dos transcritos de SmZF1 induzido em esquistossômulos foi transiente, uma vez que o mesmo não se manteve nos vermes adultos, derivados dos esquistossômulos transformados. Também não foram observadas alterações nos parâmetros histopatológicos avaliados nos fígados dos camundongos infectados com esquistossômulos silenciados para os transcritos de SmZF1. Os resultados sugerem o envolvimento de SmZF1 no desenvolvimento larval e no estabelecimento da infecção de S. mansoni no hospedeiro vertebrado.Schistosomiasis is a disease caused by parasites of Schistosoma genus. This parasitic disease is one of the most prevalent among the neglected tropical diseases affecting over 240 million people worldwide. In Brazil, schistosomiasis is caused by Schistosoma mansoni. S. mansoni is exposed to different environments during its complex life cycle, in which the regulation of gene expression plays a central role in the morphological and physiological changes required for parasite development. The SmZF1 protein, a transcription factor from S. mansoni that contains four C2H2 zinc fingers, represents a potential research target for the understanding of gene expression control associated to the parasite larval development and adult worm reproduction. Herein we performed functional studies through RNA interference (RNAi) in order to investigate whether SmZF1 is involved in the establishment of S. mansoni infection in the mammalian host. Therefore, we induced the silencing of SmZF1 mRNA by soaking schistosomula cultivated in vitro with SmZF1 dsRNA for seven days. We show that SmZF1 transcript levels were effective and specifically reduced by 69% relative to untreated control. Schistosomula growth was slightly affected after two days of treatment with SmZF1 dsRNA. Futhermore, the gene expression of two putative genes targeted by SmZF1, Smp_065180 and Smp_030710 were not significantly affected by SmZF1 silencing. We found that SmZF1 knockdown was transient, because the RNAi induced in schistosomules did not persisted in adult worms derived from mice infected with dsRNA-treated parasites. In addition, parasite and liver egg burden recovered from mice infected with transformed schistosomula compared to control infection was significantly reduced by 72% and 70%, respectively. We observed no changes in histopathological parameters from liver of mice infected with knockdown schistosomula. The results suggest that SmZF1 might play a role during S. mansoni larval development and parasite infection establishment in the mammalian host.Universidade Federal de Minas GeraisUFMGBioquímica e imunologiaBioquímica e ImunologiaCaracterização funcional do fator de transcrição SmZF1 de Schistosoma mansoni por interferência de RNA (RNAi)info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMGORIGINALdisserta__o_isadora_corrigida.pdfapplication/pdf3521227https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-AB6QDA/1/disserta__o_isadora_corrigida.pdf6ae85744b10bd0c0a37b33146e7887bfMD51TEXTdisserta__o_isadora_corrigida.pdf.txtdisserta__o_isadora_corrigida.pdf.txtExtracted texttext/plain202019https://repositorio.ufmg.br/bitstream/1843/BUBD-AB6QDA/2/disserta__o_isadora_corrigida.pdf.txt6ffee271f409e986eebd5c9b6e20695cMD521843/BUBD-AB6QDA2019-11-14 03:48:42.122oai:repositorio.ufmg.br:1843/BUBD-AB6QDARepositório de PublicaçõesPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oaiopendoar:2019-11-14T06:48:42Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false
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Bioquímica e Imunologia
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