Caracterização in silico, clonagem e expressão heteróloga em Escherichia coli de cinco proteínas de Corynebacterium pseudotuberculosis possivelmente implicadas na virulência deste microrganismo

• Autor(a) principal: Karina Talita de Oliveira Santana
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-9UVNGZ
• topic: Corynebacterium pseudotuberculosis; Fatores de virulência; Expressão heteróloga; Corynebacterium pseudotuberculosis; Linfadenite caseosa; Escherichia coli; Fatores de virulência; Interações hospedeiro-patógeno; Genética

Corynebacterium pseudotuberculosis é o agente causador da Linfadenite caseosa (LC), doença que acomete pequenos ruminantes e acarreta diminuição de produtividade e prejuízos no agronegócio. Diferentes abordagens são estudadas visando o controle desta doença através da identificação de novas drogas ou desenvolvimento de testes diagnóstico e vacina. No entanto, ainda não foi alcançada eficácia satisfatória para o controle da LC. O sequenciamento de genomas de Corynebacterium pseudotuberculosis tem possibilitado a identificação de novos fatores de virulência deste microrganismo o que contribui para o melhor entendimento de sua biologia e das relações patógeno-hospedeiro. Neste trabalho, foram selecionadas como alvo de estudo, com base em análises in silico e busca na literatura, as proteínas PLD, PknG, SpaC, SodC e NanH. A PLD representa o principal fator de virulência de C. pseudotuberculosis e as demais são indicadas como potenciais fatores de virulência. Foram realizadas as caracterizações in silico destas proteínas a partir de predições de parâmetros físico-químicos, peptídeo sinal, domínios conservados, avaliação da sua conservação em eucariotos e epítopos. Além disso, as proteínas foram expressas utilizando sistema de expressão heteróga em Escherichia coli e foram testadas cinco diferentes linhagens de expressão. A partir das linhagens que apresentaram o melhor nível de expressão de cada uma das proteínas, avaliou-se a cinética de expressão e a solubilidade da fração protéica. A proteína PknG foi purificada após otimização do protocolo de expressão para obtenção da proteína na fração solúvel e a purificação foi confirmada por Western blot. A partir da purificação das demais proteínas, esperamos avaliá-las quanto à sua antigenicidade e proteção contra infecção. Uma vez que fatores de virulência são importantes candidatos a alvos de drogas, testes diagnóstico ou, ainda, alvos vacinais, a obtenção destas proteínas é importante por viabilizar diversos estudos que podem contribuir para o desenvolvimento de uma estratégia de controle da LC.