Identificação de novos antígenos de espécies do gênero Leishmania com potencial uso no diagnóstico sorológico da leishmaniose visceral

• Autor(a) principal: Ana Luiza Teixeira Silva
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/34809
• topic: Parasitologia; Leishmaniose visceral; Parasitologia; Leishmaniose visceral; Antígenos; Leishmania; Escherichia coli

Avanços para um diagnóstico mais eficiente da leishmaniose visceral faz-se necessário, pois essa doença pode ser fatal, se não tratada. Apesar do contínuo desenvolvimento de testes de imunodiagnóstico, limitações intrínsecas de cada técnica resultam em um diagnóstico incerto. Durante os últimos anos, nosso grupo vem desenvolvendo estudos de imunogenômica para a busca de novos antígenos que sejam mais sensíveis e específicos. Utilizando metodologias de mineração de dados, é possível identificar proteínas ou peptídeos presentes nos parasitos que exibem certa homologia a moléculas do hospedeiro que estão associadas à resposta imunológica, que podem ser o diferencial na tentativa de melhoria de testes diagnósticos. Neste contexto, o presente estudo identificou e testou três proteínas de Leishmania que apresentam similaridade com proteínas presentes no banco de dados ImmunomeBase, o qual dispõe de proteínas de Homo sapiens com função biológica associada a processos de defesa do hospedeiro previamente caracterizadas. Foram selecionados para esse trabalho os genes que codificam a proteína ATP difosfohidrolase de L. infantum (EctoLi), a proteína de ligação ao GTP de L. infantum (MyxoLi) e de L. mexicana (MyxoLm) e a proteína tirosina fosfatase de L. braziliensis (TyroLb). Esses alvos foram expressos em um sistema heterólogo, utilizando como vetor o plasmídeo pET28a-TEV e como sistema de expressão Escherichia coli da cepa BL21 e Arctic Express. Após a purificação por cromatografia de afinidade, as proteínas foram utilizadas como antígenos no teste sorológico por ELISA para leishmaniose visceral humana (LVH) e canina (LVC). As propriedades antigênicas das proteínas foram avaliadas e epítopos lineares de célula B foram identificados. Na validação com soros de cães, a eficiência do teste foi capaz de discriminar as amostras positivas de negativas e a qualidade dos testes com os antígenos recombinantes, baseada na área sob a curva ROC, foi entre bom e excelente, sugerindo que estas proteínas constituem bons candidatos para uma triagem inicial dos animais e/ou teste confirmatório de LVC. Em destaque, os testes com EctoLi e MyxoLi apresentaram alta especificidade, sendo úteis não só para determinar os verdadeiros positivos e verdadeiros negativos, como também para distinguir reações cruzadas. O valor preditivo positivo e a acurácia para esses testes foram superiores ao observado para o kit EIE-LVC – Bio-Manguinhos, sugerindo que os antígenos testados no trabalho são melhores candidatos para o diagnóstico de LVC. Na validação com soros de pacientes humanos, a proteína recombinante EctoLi demonstrou um bom desempenho no teste diagnóstico e destacou-se pela alta especificidade, sendo capaz de separar significativamente pacientes infectados de não infectados e com doença de Chagas, sugerindo ser um bom candidato para teste confirmatório de LVH. Em adição, a proteína truncada MyxoTLm mostrou ser uma boa candidata para o sorodiagnóstico de tripanossomatídeos (Leishmania e Trypanossoma cruzi) com 100% de especificidade e 90% sensibilidade, sendo seu uso sugerido para triagem em bancos de sangue. A partir dos dados obtidos, nosso trabalho sugere que a estratégia do ELISA baseado em proteínas recombinantes, homólogas ao sistema imune do hospedeiro, pode ser útil para o desenvolvimento de um teste sensível e altamente específico para o sorodiagnóstico desta parasitose.