Produção e caracterização da proteína recombinante LipL32 de Leptospira spp

• Autor(a) principal: Barbara Nobre Lafeta
• Data de Publicação: 2010
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/SMOC-9HCPXE
• topic: Icterohaemorrhagiae; LipL32; Pomona e Wolffi; proteínas de membrana; Leptospira interrogans Hardjobovis; Veterinária; Ciência Animal; Proteínas da membrana; Leptospirose em animais; Proteínas Eletroforese

Este trabalho teve como objetivo caracterizar o perfil das proteínas da membrana externa (PMEs) da Leptospira interrogans sorovariedades Hardjobovis, Icterohaemorrhagiae, Pomona e Wolffi; produzir e testar a proteína LipL32 frente ao soro de animais naturalmente infectados.Foram utilizadas técnicas de extração da membrana externa com Triton X114 e precipitação das proteínas com acetona, clonagem e subclonagem do gene LipL32, otimização do gene LipL32 para códons próprios da E. coli, construção do gene LipL32 de forma sintética,produção da proteína LipL32 e testes Western blot com a proteína recombinante LipL32. Na eletroforese com gel de poliacrilamida sob condições desnaturantes as bandas de massa molecular iguais a 22, 29, 32, 36, 41 e 48 KDa apresentaram-se como os principais componentes das PME das quatro sorovariedades testadas. Nos testes de Western blot as bandas com massas moleculares iguais a de 22, 29, 32, 41, 48, 52 e 75 KDa reagiram em todas as sorovariedades testadas. A expressão do gene sintético LipL32 foi realizada com sucesso, porém não foram obtidos níveis de expressão satisfatórios. A proteína LipL32recombinante foi reagente em todos os testes de Western blot realizados.