Comparação de características estruturais e funcionais de espermatozoides bubalinos com maior ou menor sensibilidade à criopreservação

• Autor(a) principal: Beatriz Parzewski Neves
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/34840; https://orcid.org/0000-0003-2172-6567
• topic: Criopreservação sêmen; Citometria de fluxo; Congelabilidade; Búfalo

Este estudo teve como objetivo avaliar, em espermatozoides bubalinos, as diferenças estruturais e funcionais, que podem influenciar a sua resistência ao processo de congelamento-descongelamento. Um total de 90 ejaculados, coletados por meio de vagina artificial de 13 touros Murrah (Bubalus bubalis), foram avaliados, diluídos em meio Tris-ácido cítrico-frutose contendo 10% de lipoproteínas de baixa densidade, e submetidos ao congelamento-descongelamento. Durante o processo, os ejaculados foram avaliados por sistema computadorizado (CASA) em seis momentos: pré-resfriamento (PR), pré-congelamento (PC), cinco minutos pós-descongelamento (PD_T5) e a cada uma hora durante a incubação pós-descongelamento à 37 °C (PD_T60, PD_T120 e PD_T180). De acordo com a longevidade da motilidade total, obtida pela diferença entre as avaliações no PR e no PD_T180, foram formados dois grupos de acordo com a resistência espermática ao processo de congelamento-descongelamento: os ejaculados que perderam menos que 41,2% da motilidade total entre as duas avaliações compuseram o grupo de resistência espermática boa (RB, n=23), e aqueles que perderam mais que 65,1% compuseram o grupo de resistência espermática ruim (RR, n=22). Em cada ejaculado, foram avaliados por citometria de fluxo: integridade das membranas plasmática e acrossômica (MPA), estabilidade da membrana plasmática, potencial de membrana mitocondrial (HMP), produção de peróxido de hidrogênio intracelular (H2O2), produção de ânion superóxido (O2•-) e peroxidação lipídica (LPO), utilizando as sondas IP e FITC-PSA, YOPRO-1, MitoStatus Red, CM-H2DCFDA, MitoSOXTM Red e C11-BODYPY (Molecular Probes), respectivamente. Considerou-se como significativo p≤0,05. Os espermatozoides do grupo RR apresentaram motilidade progressiva e os parâmetros de cinética VCL, VSL, VAP, BCF e ALH inferiores, principalmente durante a incubação após o descongelamento. Também foram inferiores na MPA e na estabilidade da membrana plasmática, nos tempos PD_T5 e PD_T180. O metabolismo mitocondrial foi inferior nos espermatozoides do grupo RR, tanto na porcentagem de células com HMP, como na intensidade de HMP em células íntegras no PD_T5 e PD_T180, e em células lesadas, no PD_T5. No grupo RR, a produção de O2•- foi superior e a produção de H2O2 foi inferior, tanto no PD_T5 quanto no PD_T180. A LPO foi semelhante entre os dois grupos, em ambos os tempos avaliados (PD_T5 e PD_T180), mesmo após o desafio com ácido araquidônico, realizado no PD_T5. Por este estudo, sugere-se que a diferença da resistência espermática ao congelamento-descongelamento, entre os ejaculados de touros bubalinos, se relaciona com a sensibilidade da membrana plasmática e com o metabolismo mitocondrial, que resultam em alterações dos parâmetros de motilidade e cinética espermáticas, sem induzir danos oxidativos como a peroxidação lipídica.