Padronização da técnica de qPCR para quantificação do comprimento relativo telomérico no Caenorhabditis elegans

• Autor(a) principal: Taynná El Cury Silva
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AMQP5Y
• topic: Caenorhabditis elegans; Padronização; Telômero; qPCR; Caenorhabditis elegans; Cromossomos; Telômero; Telomerase; Reação em cadeia da polimerase

O telômero exerce papel fundamental na capacidade replicativa celular e através de seu comprimento tem-se uma estimativa da vida média da célula. Evidências demonstram que influências ambientais, sociais, nutritivas e fisiopatológicas podem implicar na variação de tamanho telomérico. Assim esse estudo teve como objetivo a padronização da técnica de qPCR para quantificação do comprimento relativo telomérico no nematódeo Caenorhabditis elegans. O uso desse organismo como modelo já se mostrou viável para estudar telômeros. Estudos mostraram que o nematódeo possui um complexo telomérico semelhante aos mamíferos e suas principais características como curto ciclo de vida, fácil manipulação e versatilidade genética, o tornam um sistema ótimo para investigar mecanismos moleculares iniciais que possam interferir no tamanho telomérico. Estas características são, especialmente, válidas para desenvolvimento de pesquisas porvindouras mais direcionadas e embasadas em modelos vertebrados, objetivando-se uma efetiva aplicação clínica futura. Também foi levado em consideração o interesse em medir o comprimento dos telômeros no C. elegans utilizando um método menos operoso, mais acessível e rápido, ultrapassando os limites impostos por técnicas até hoje padronizadas para o nematódeo. Foram utilizadas as seguintes cepas: N2 (selvagem), CB3192 (selvagem), sabidamente com telômero maior, e YA1059, previamente descrita na literatura com telômero menor. Os nossos resultados demonstraram coeficientes lineares para cada gene com valores próximos a 1 (Telômero R² = 0,95 / C44B7.8 - R² = 0,91 / T09F3.3 - R² = 0,91 / F25B4.6 - R² = 0,93) e diferenças significativas entre cepas com tamanhos de telômeros distintos (p< 0,0001 para CB3192 > N2 e CB3192 > YA1059; p= 0,0069 para N2 > YA1059). Os resultados encontrados confirmam a capacidade da técnica em detectar diferentes tamanhos de telômeros perante diferentes cepas em C. elegans. Contudo, a validação da técnica qPCR com o método padrão ouro ainda se faz necessária.