Análise da variabilidade intrapopulacional entre duas cepas de Ancylostoma ceylanicum utilizando marcadores mitocondriais

• Autor(a) principal: João Alexsander Silva Costa
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/64965
• topic: Ancylostoma ceylanicum; Resistência; Benzimidazóis; Marcadores Mitocondriais; SNPs; Parasitologia; Ancylostoma; Benzimidazóis; Polimorfismo de Nucleotídeo Único

O uso indiscriminado de benzimidazóis para o tratamento da ancilostomíase pode selecionar cepas resistentes ao tratamento. Polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) nos códons 167, 198 e 200 do gene codificador da β-tubulina isotipo 1, proteína alvo do fármaco, estão associados com a resistência aos benzimidazóis em nematódeos. Em um trabalho prévio do nosso grupo de pesquisa, foi isolada uma cepa de A. ceylanicum resistente ao albendazol por pressão seletiva do fármaco a partir de uma cepa selvagem de Ancylostoma ceylanicum mantida há mais de 15 anos em modelo experimental. O objetivo deste trabalho foi analisar a variabilidade molecular intrapopulacional da cepa resistente ao albendazol em comparação com a cepa selvagem, assim como avaliar a porcentagem da presença de SNPs após quatro anos de seleção da cepa. Foram realizadas amplificações do gene COI, NAD1 e dos códons 198 e 200 do gene codificador da β-tubulina isotipo 1 das duas cepas de A. ceylanicum selvagem e resistente ao tratamento por albendazol, através de PCRs convencionais seguidas de sequenciamento. Não foram identificados SNPs nos códons 198 e 200 da cepa resistente. Além disso, para descartar a possibilidade de troca de cepas, foram sequenciadas também amostras da cepa selvagem. As amostras da cepa selvagem, conforme o esperado, não apresentaram as mutações, comprovando que houve reversão do caráter de resistência da cepa. As análises para os marcadores mitocondriais demonstraram uma baixa diversidade nucleotídica, de 0,16% para o gene COI, e de 0,25% para o gene NAD1. Ao construir árvores filegenéticas com base em dois métodos, o método de Máxima Verossimilhança e a Inferência Bayesiana, foram observados padrões muito semelhantes ao se comparar os dois modelos para ambos os marcadores, com altos valores de bootstrap, reforçando a topologia das árvores filogenéticas. Esse resultado não foi de todo surpreendente, tendo em vista que a cepa original já estava há muitos anos sem a possibilidade de recombinação com outras populações. A baixa diversidade genética encontrada em ambos os marcadores moleculares, COI e NAD1 e a ausência de SNPs no gene da β-tubulina isotipo 1 sugere que a combinação do efeito gargalo, a deriva genética e a ausência de fluxo gênico foram, em conjunto, responsáveis pela baixa variabilidade genética da população. Os dados aqui apresentados contribuem para o avanço de conhecimentos de genética populacional dos ancilostomídeos, além de servirem de base para elaborações de futuras estratégias de controle e desenvolvimento de novas terapias farmacológicas.