Avaliação in vitro de potenciais biomarcadores de nefrotoxicidade através de expressão gênica utilizando cisplatina

• Autor(a) principal: Stellamaris Soares
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-ARFP3X
• topic: Cisplatina; LLC-PK1; Nefrotoxicidade; Biomarcadores; Cisplatina; Nefrotoxicologia; Biomarcadores; Drogas Toxicologia; Rins Doenças

Os ensaios toxicológicos são obrigatórios durante o desenvolvimento de novos fármacos. No entanto, a falta de preditividade dos modelos in vivo tem aumentado a taxa de falha dos candidatos a fármacos, elevando o tempo e os custos para o desenvolvimento de um novo produto. Os métodos alternativos in vitro podem levar ao desenvolvimento de medicamentos mais seguros e com redução de custos, podendo ser utilizados nos ensaios pré-clínicos de novas moléculas. A falta de sensibilidade dos marcadores atuais para nefrotoxicidade faz com que estes efeitos sejam descobertos tardiamente. Assim, é fundamental a busca por melhores biomarcadores precoces. O sistema renal recebe grande fluxo sanguíneo devido a suas funções e, por isso, é importante alvo de toxicidade de muitos medicamentos. Considerando que os danos moleculares e celulares precedem as alterações histopatológicas, o estudo da expressão gênica diferencial induzida por medicamentos torna-se importante. Uma vez que a expressão de um conjunto de genes é consistentemente alterada após a exposição a um xenobiótico, a expressão destes genes pode ser utilizada como biomarcadores. O uso de medicamentos reconhecidamente nefrotóxicos em estudos de biomarcadores é uma maneira de identificar tais genes. A cisplatina é um quimioterápico amplamente utilizado na prática médica que tem na nefrotoxicidade sua maior limitação. As principais células renais atingidas pela nefrotoxicidade induzida por cisplatina são as do túbulo proximal. No presente estudo, células LLC-PK1 foram expostas a cisplatina por 48 horas e as concentrações de 1 µM, 6 µM e 15 µM foram escolhidas após o ensaio de MTT. A expressão diferencial de genes relacionados a nefrotoxicidade foi analisada através de PCR em tempo real nas células expostas às concentrações citadas. A diminuição da viabilidade celular observada nas concentrações de 1 µM e 6 µM não foi acompanhada de alteração na expressão dos genes estudados e necessitam de mais estudos para a compreensão de como a cisplatina afetou o crescimento celular. Os genes HAVCR1 (KIM-1), BAX, CASP9, CASP3 e ICAM-1 tiveram a expressão aumentada após exposição a 15 µM de cisplatina quando comparada a células não expostas. Nossos resultados sugerem que esses genes podem ser utilizados como biomarcadores in vitro de nefrotoxicidade, necessitando de mais estudos para validação dos mesmos.