Análise óptica da junção neuromuscular de diafragma em modelo de camundongo transgênico para doença de Huntington

• Autor(a) principal: Barbara Campos de Aragao
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-9C2HE4
• topic: Biologia Celular; Morfologia; Doença de Huntington

A doença de Huntington (DH) é uma doença neurodegenerativa caracterizada por um declínio progressivo das funções motoras e cognitivas, incluindo movimentos involuntários dos membros e da face, alterações de personalidade e demência. Ela é causada pela repetição do trinucleotídeo CAG que leva a uma expansão poliglutamínica da proteína huntingtina. Sabe-se que huntingtina é altamente expressa nos sistemas nervoso central e periférico. No interior dos neurônios, esta proteína se liga a vesículas sinápticas e interage com várias proteínas associadas ao transporte vesicular. Assim, sugere-se que a huntingtina mutante pode interferir com a liberação de neurotransmissores causando disfunção sináptica, o que pode agravar a deficiência motora característica da doença. Dados anteriores indicam uma redução da neurotransmissão colinérgica em neurônios do Sistema Nervoso Central, bem como comprometimento motor em modelos animais para DH. Baseado nestas evidências, este estudo tem como objetivo principal avaliar as possíveis alterações na junção neuromuscular do músculo diafragma de camundongos BACHDQ97, modelo transgênico para DH, cuja progressão da doença é mais lenta quando comparada às linhagens previamente estabelecidas. Esse modelo representa um novo e robusto paradigma in vivo para estudar a patogênese da DH. Resumidamente, para análise óptica, as preparações nervo ciático-músculo diafragma foram isoladas e coradas com a sonda vital FM1-43 (4M) e -bungarotoxina-Alexa 594 (12 M) para visualizar terminais pré-sinápticos e aglomerados de receptores nicotínicos, respectivamente. A sonda FM1-43 é uma ferramenta útil para se acompanhar exocitose, endocitose e reciclagem de vesículas sinápticas. Utilizando a microscopia de fluorescência e confocal foram realizadas análises de parâmetros morfológicos em animais BACHDQ97 e WT. Nós observamos que os elementos pré e pós-sinápticos de animais BACHDQ97 apresentaram-se menos fluorescentes quando comparados aos de animais WT. Vimos também que a taxa de desmarcação/exocitose dos terminais previamente marcados com o FM1-43 foi menor nos animais transgênicos. Além disso, estudos ultraestruturais foram realizados utilizando a técnica de microscopia eletrônica de transmissão (MET), para caracterizar o aspecto morfológico das sinapses neuromusculares nestes animais. Vimos que os elementos sinápticos das junções neuromusculares de camundongos BACHDQ97 apresentaram morfologia ultraestrutural geral semelhante aos dos animais WT. Nossos resultados indicam uma deficiência funcional de elementos pré e pós-sinápticos que podem afetar a função motora em animais BACHDQ97.