Relação do perfil proteômico diferencial do plasma seminal de búfalos com a longevidade espermática pós descongelamento

• Autor(a) principal: Patrícia de Alencar Auler
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/57208
• topic: Bufalo; Sêmen; Reprodução animal; Reprodução animal

O objetivo do presente trabalho foi avaliar as diferenças no perfil proteômico do plasma seminal de búfalos (Bubalus bubalis) relacionadas à resistência espermática ao processo de congelamentodescongelamento. Para tanto, um total de 118 ejaculados obtidos de 13 touros búfalo foram submetidos ao processo de congelamento de espermatozoides. Previamente ao processamento, uma alíquota de cada ejaculado foi centrifugada para recuperação do plasma seminal para posterior análise proteômica. A resposta dos espermatozoides ao processo de congelamento-descongelamento foi avaliada a partir dos parâmetros de motilidade e da cinética espermática, fornecidos pelo CASA (Computer Assisted Sperm Analysis), nos tempos: imediatamente antes do resfriamento (PR), imediatamente antes do congelamento (PC) e após o descongelamento nos tempos 5 (PD_T5), 60 (PD_T60), 120 (PD_T120) e 180 (PD_T180) minutos. As diferenças no perfil proteômico do plasma seminal foram avaliadas por eletroforese diferencial (difference in-gel electrophoresis, DIGE). Para todas a análises, utilizou-se p ≤ 0,05. Grande variação inter e intra-indivíduo foi observada na longevidade da motilidade espermática após o descongelamento, sendo a maior variabilidade observada entre os ejaculados de um mesmo animal. A partir do declínio da motilidade total entre os tempos PR e PD_T180, foram selecionados os ejaculados que apresentaram maior (grupo de resistência espermática boa_RB, n = 21) e menor (grupo de resistência espermática ruim_RR, n = 19) resistência espermática ao congelamentodescongelamento. Os ejaculados RB e RR foram semelhantes quanto às características espermáticas nas avaliações anteriores ao congelamento, exceto para os parâmetros de velocidade (VCL, VSL, VAP), os quais foram maiores no grupo RB (p ≤ 0,05). Imediatamente após o descongelamento e durante o período de incubação, os ejaculados RB mantiveram maior velocidade (VCL, VSL, VAP), e apresentaram maior motilidade total e porcentagem de células rápidas em todos os tempos de avaliação (p ≤ 0,05). Após o descongelamento, principalmente ao final do período de incubação (120 e/ou 180 minutos), o grupo RB também apresentou maiores valores de ALH, STR, BCF e LIN (p ≤ 0,05). Nove ejaculados RB e oito RR foram selecionados para a análise proteômica. Trinta e quatro spots foram diferencialmente intensos nos pools de plasma seminal RBp e RRp, sendo 30 mais intensos no grupo RBp e quatro no grupo RRp (p ≤ 0,05). Dentre os spots de maior intensidade no grupo RBp, 14 apresentaram peso molecular entre 33 e 41 kDa e ponto isoelétrico entre 4,2 e 4,9, respectivamente, e representaram 41,2% do número total de spots diferencialmente intensos e 43,8% da intensidade relativa total. Desses 14 spots, 12 foram identificados por espectrometria de massas em MALDI-TOF/TOF como Clusterinas. Além disso, dentre os spots de maior intensidade no grupo RRp, foi identificada a proteína 14-3-3 zeta/delta. Concluiu-se que os ejaculados de búfalos apresentaram grande variação na resistência espermática ao processo de congelamento-descongelamento, caracterizada por maior sobrevivência e, principalmente, longevidade dos espermatozoides após o descongelamento. Por fim, diferenças no perfil proteômico do plasma seminal foram observadas entre os ejaculados de maior e menor resistência espermática, sendo a proteína clusterina mais abundante no plasma seminal dos ejaculados cujos espermatozoides foram mais resistentes ao processo.