Combining Xylose Reductase from Spathaspora arborariae with Xylitol Dehydrogenase from Spathaspora passalidarum to Promote Xylose Consumption and Fermentation into Xylitol by Saccharomyces cerevisiae
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Data de Publicação: | 2020 |
Outros Autores: | , , , , , , |
Tipo de documento: | Artigo |
Idioma: | eng |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFMG |
Texto Completo: | https://doi.org/10.3390/fermentation6030072 http://hdl.handle.net/1843/73127 https://orcid.org/0000-0003-2448-7063 https://orcid.org/0000-0001-7507-1020 |
Resumo: | Nos últimos anos, muitas novas leveduras fermentadoras de xilose pertencentes ao novo gênero Spathaspora foram isoladas do intestino de insetos que se alimentam de madeira e/ou de substratos que decompõem a madeira. Clonamos e expressamos, em Saccharomyces cerevisiae, um gene de xilose redutase de Spathaspora arborariae (SaXYL1) que aceita NADH e NADPH como co-substratos, bem como uma xilose redutase dependente de NADPH de Spathaspora passalidarum (gene SpXYL1.1) e o SpXYL2 .2 gene que codifica uma xilitol desidrogenase dependente de NAD+. Estas enzimas foram co-expressas numa estirpe de S. cerevisiae que sobre-expressa o gene nativo XKS1 que codifica a xiluloquinase, bem como foram eliminadas na fosfatase alcalina codificada pelo gene PHO13. As cepas de S. cerevisiae que expressam as enzimas Spathaspora consumiram xilose, e o xilitol foi o principal produto da fermentação. Maiores taxas de crescimento específico, consumo de xilose e produtividades volumétricas de xilitol foram obtidas pela coexpressão dos genes SaXYL1 e SpXYL2.2, quando comparadas com a coexpressão da xilose redutase SpXYL1.1 dependente de NADPH. Durante a cofermentação glicose-xilose pela cepa com coexpressão dos genes SaXYL1 e SpXYL2.2, tanto etanol quanto xilitol foram produzidos eficientemente. Nossos resultados abrem a possibilidade de utilização das vantajosas leveduras Saccharomyces para a produção de xilitol, uma commodity com amplas aplicações comerciais nas indústrias farmacêutica, nutracêutica, alimentícia e de bebidas. |
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Combining Xylose Reductase from Spathaspora arborariae with Xylitol Dehydrogenase from Spathaspora passalidarum to Promote Xylose Consumption and Fermentation into Xylitol by Saccharomyces cerevisiaeXylose reductaseXylitol dehydrogenaseSpathasporaSaccharomycesXylitolXyloseAldeído RedutaseD-Xilulose redutaseSaccharomycesXilitolXiloseNos últimos anos, muitas novas leveduras fermentadoras de xilose pertencentes ao novo gênero Spathaspora foram isoladas do intestino de insetos que se alimentam de madeira e/ou de substratos que decompõem a madeira. Clonamos e expressamos, em Saccharomyces cerevisiae, um gene de xilose redutase de Spathaspora arborariae (SaXYL1) que aceita NADH e NADPH como co-substratos, bem como uma xilose redutase dependente de NADPH de Spathaspora passalidarum (gene SpXYL1.1) e o SpXYL2 .2 gene que codifica uma xilitol desidrogenase dependente de NAD+. Estas enzimas foram co-expressas numa estirpe de S. cerevisiae que sobre-expressa o gene nativo XKS1 que codifica a xiluloquinase, bem como foram eliminadas na fosfatase alcalina codificada pelo gene PHO13. As cepas de S. cerevisiae que expressam as enzimas Spathaspora consumiram xilose, e o xilitol foi o principal produto da fermentação. Maiores taxas de crescimento específico, consumo de xilose e produtividades volumétricas de xilitol foram obtidas pela coexpressão dos genes SaXYL1 e SpXYL2.2, quando comparadas com a coexpressão da xilose redutase SpXYL1.1 dependente de NADPH. Durante a cofermentação glicose-xilose pela cepa com coexpressão dos genes SaXYL1 e SpXYL2.2, tanto etanol quanto xilitol foram produzidos eficientemente. Nossos resultados abrem a possibilidade de utilização das vantajosas leveduras Saccharomyces para a produção de xilitol, uma commodity com amplas aplicações comerciais nas indústrias farmacêutica, nutracêutica, alimentícia e de bebidas.In recent years, many novel xylose-fermenting yeasts belonging to the new genus Spathaspora have been isolated from the gut of wood-feeding insects and/or wood-decaying substrates. We have cloned and expressed, in Saccharomyces cerevisiae, a Spathaspora arborariae xylose reductase gene (SaXYL1) that accepts both NADH and NADPH as co-substrates, as well as a Spathaspora passalidarum NADPH-dependent xylose reductase (SpXYL1.1 gene) and the SpXYL2.2 gene encoding for a NAD+-dependent xylitol dehydrogenase. These enzymes were co-expressed in a S. cerevisiae strain over-expressing the native XKS1 gene encoding xylulokinase, as well as being deleted in the alkaline phosphatase encoded by the PHO13 gene. The S. cerevisiae strains expressing the Spathaspora enzymes consumed xylose, and xylitol was the major fermentation product. Higher specific growth rates, xylose consumption and xylitol volumetric productivities were obtained by the co-expression of the SaXYL1 and SpXYL2.2 genes, when compared with the co-expression of the NADPH-dependent SpXYL1.1 xylose reductase. During glucose-xylose co-fermentation by the strain with co-expression of the SaXYL1 and SpXYL2.2 genes, both ethanol and xylitol were produced efficiently. Our results open up the possibility of using the advantageous Saccharomyces yeasts for xylitol production, a commodity with wide commercial applications in pharmaceuticals, nutraceuticals, food and beverage industries.CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoCAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível SuperiorFINEP - Financiadora de Estudos e Projetos, Financiadora de Estudos e ProjetosUniversidade Federal de Minas GeraisBrasilICB - DEPARTAMENTO DE BOTÂNICAICB - DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGIAUFMG2024-08-06T22:28:38Z2024-08-06T22:28:38Z2020info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/articlepdfapplication/pdfhttps://doi.org/10.3390/fermentation60300722311-5637http://hdl.handle.net/1843/73127https://orcid.org/0000-0003-2448-7063https://orcid.org/0000-0001-7507-1020engFermentationAdriane MouroAngela A. dos SantosDenis D. AgnoloGabriela F. GubertElba P. S. BonCarlos Augusto RosaCésar FonsecaBoris U. Stambukinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFMGinstname:Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)instacron:UFMG2024-08-06T22:28:39Zoai:repositorio.ufmg.br:1843/73127Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufmg.br/oairepositorio@ufmg.bropendoar:2024-08-06T22:28:39Repositório Institucional da UFMG - Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG)false |
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Nos últimos anos, muitas novas leveduras fermentadoras de xilose pertencentes ao novo gênero Spathaspora foram isoladas do intestino de insetos que se alimentam de madeira e/ou de substratos que decompõem a madeira. Clonamos e expressamos, em Saccharomyces cerevisiae, um gene de xilose redutase de Spathaspora arborariae (SaXYL1) que aceita NADH e NADPH como co-substratos, bem como uma xilose redutase dependente de NADPH de Spathaspora passalidarum (gene SpXYL1.1) e o SpXYL2 .2 gene que codifica uma xilitol desidrogenase dependente de NAD+. Estas enzimas foram co-expressas numa estirpe de S. cerevisiae que sobre-expressa o gene nativo XKS1 que codifica a xiluloquinase, bem como foram eliminadas na fosfatase alcalina codificada pelo gene PHO13. As cepas de S. cerevisiae que expressam as enzimas Spathaspora consumiram xilose, e o xilitol foi o principal produto da fermentação. Maiores taxas de crescimento específico, consumo de xilose e produtividades volumétricas de xilitol foram obtidas pela coexpressão dos genes SaXYL1 e SpXYL2.2, quando comparadas com a coexpressão da xilose redutase SpXYL1.1 dependente de NADPH. Durante a cofermentação glicose-xilose pela cepa com coexpressão dos genes SaXYL1 e SpXYL2.2, tanto etanol quanto xilitol foram produzidos eficientemente. Nossos resultados abrem a possibilidade de utilização das vantajosas leveduras Saccharomyces para a produção de xilitol, uma commodity com amplas aplicações comerciais nas indústrias farmacêutica, nutracêutica, alimentícia e de bebidas. |
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