Diagnóstico da tuberculose bovina por ELISA com proteínas recombinantes

• Autor(a) principal: Rodrigues, Thais de Andrade Farias
• Data de Publicação: 2009
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMS
• Texto Completo: https://repositorio.ufms.br/handle/123456789/974
• topic: Tuberculose Bovina; Doenças Infecciosas em Animais; Mycobacterium Bovis; ELISA em Animal; Técnicas Imunológicas em Animais

A tuberculose bovina é uma importante enfermidade infecciosa, causada pela bactéria Mycobacterium bovis. O gene que codifica para a proteína MPB70 está presente no genoma de M. bovis e apresenta alta especificidade para o complexo M. tuberculosis, representando um potencial antígeno para o diagnóstico da tuberculose bovina. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um ELISA utilizando-se a proteína recombinante MPB70 de M. bovis para detecção de anticorpos contra essa bactéria em bovinos. O gene mpb70 foi amplificado por PCR e clonado em plasmídeo pGEM-T Easy. Após digestão com a enzima Eco RI, o gene foi subclonado em plasmídeo de expressão pGEX-3X. A expressão do gene foi verificada por eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida e coloração com azul brilhante de Coomassie; bem como por meio de Western blot com anticorpo anti-glutationa-S-transferase (GST). Após padronização do ELISA, foram testadas 137 amostras de soros bovinos positivos, negativos e inconclusivos na tuberculinização. Na eletroforese em gel de SDS-poliacrilamida foi possível observar uma proteína recombinante aproximadamente 48 kDa, que corresponde à massa molecular estimada da fusão GST/MPB70. No Western blot, a MPB70 recombinante fusionada à GST, foi reconhecida pelo anticorpo anti-GST, confirmando a expressão do gene. Para o ELISA com MPB70 recombinante, detectou-se sensibilidade e especificidade de 88,7% e 94,6%, respectivamente. A utilização de um teste sorológico, como o ELISA com MPB70 recombinante, em conjunto com os testes celulares, poderá elucidar uma parte dos problemas encontrados nos programas de controle da tuberculose bovina, como o alto número de resultados inconclusivos e a não detecção de animais anérgicos em fase avançada da doença. Além disso, pode também ser utilizado como teste de triagem de tuberculose bovina, previamente à confirmação com intradermorreação.