Caracterização bioquímica e genética de isolados de Proteus mirabilis provenientes do Riacho do Cavouco, Recife-PE
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Data de Publicação: | 2017 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPE |
Texto Completo: | https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/30484 |
Resumo: | A presença de bactérias resistentes no ambiente aquático provenientes dos seres humanos e animais expostos a antimicrobianos é um dos principais problemas desse ecossistema. O riacho Cavouco é um afluente do rio Capibaribe, principal rio de Pernambuco. Esse riacho, durante seu percurso, recebe um aporte de carga poluidora de resíduos. Diferentes espécies bacterianas foram identificadas nesse ambiente, como Proteus mirabilis, que ocorre na água, no solo, no trato gastrointestinal humano e de outros animais. O presente estudo objetivou caracterizar genética e bioquimicamente os isolados de P. mirabilis obtidos do riacho Cavouco, em comparação com isolados clínicos de mesma espécie. A cepa 767 (UFPEDA) foi utilizada como controle de referência. A identidade dos isolados foi confirmada pela técnica MALDI-TOF-MS, que se mostrou eficiente com alto grau de compatibilidade com a espécie P. mirabilis. O perfil de susceptibilidade foi realizado em triplicata por meio do antibiograma, o perfil de hidrofobicidade pelo método de aderência a hidrocarboneto, a formação de biofilme em diferentes meios (LB, BHI e TSB) pelo método do cristal violeta e MEV, além da a erradicação do biofilme pelos antimicrobianos utilizados no antibiograma. A diversidade genética dos isolados foi analisada por ERIC-PRC. Dois isolados clínicos (ICP4, ICP5) se mostraram multirresistentes, enquanto que os isolados ambientais apresentaram resistência apenas a tetraciclina, exceto o isolado CP525S que se mostrou resistente também a ampicilina. Todos os isolados apresentaram capacidade para a formação de biofilme nos meios testados. Porém, todos os antimicrobianos foram capazes de erradicar o biofilme formado em mais de 50% dos isolados ambientais e, parte desses agentes, erradicou o biofilme dos isolados clínicos (≥ 50%). Não foi possível observar formação de biofilme por MEV utilizando lamínulas de vidro. Quanto ao perfil de hidrofobicidade, três isolados ambientais se mostram moderadamente hidrofóbicos e os demais hidrofílicos. Pela técnica ERIC-PCR não foi possível diferenciar os isolados diferenciar os isolados clínicos dos ambientais nem entre os isolados de um mesmo grupo. A resistência a tetraciclina pelos isolados, deve-se a mecanismos intrínsecos de resistência conforme dados da literatura. Já a multirresistência por isolados clínicos pode ser adquirida, uma vez que o ambiente hospitalar abriga diversos genes de resistência. Por outro lado, a expressiva formação de biofilme, sobretudo pelos isolados ambientais, indica um mecanismo de proteção em resposta ao ambiente impactado no qual vivem, independe da significativa erradicação de biofilme, pois esses isolados podem não está sob pressão seletiva direta a estes antimicrobianos. Neste estudo, os isolados se mostraram maioritariamente hidrofílicos com baixa capacidade de aderência em lamínulas de vidro, possivelmente, devido a forças repulsivas. Os diferentes perfis de resistência encontrados não garante a presença de clones bacterianos distintos entre os isolados investigados, uma vez que foi observado clonalidade entre os clínicos e ambientais. Entretanto, a presença de bactérias potencialmente produtoras de biofilme no riacho Cavouco é preocupante para a saúde pública. |
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A cepa 767 (UFPEDA) foi utilizada como controle de referência. A identidade dos isolados foi confirmada pela técnica MALDI-TOF-MS, que se mostrou eficiente com alto grau de compatibilidade com a espécie P. mirabilis. O perfil de susceptibilidade foi realizado em triplicata por meio do antibiograma, o perfil de hidrofobicidade pelo método de aderência a hidrocarboneto, a formação de biofilme em diferentes meios (LB, BHI e TSB) pelo método do cristal violeta e MEV, além da a erradicação do biofilme pelos antimicrobianos utilizados no antibiograma. A diversidade genética dos isolados foi analisada por ERIC-PRC. Dois isolados clínicos (ICP4, ICP5) se mostraram multirresistentes, enquanto que os isolados ambientais apresentaram resistência apenas a tetraciclina, exceto o isolado CP525S que se mostrou resistente também a ampicilina. Todos os isolados apresentaram capacidade para a formação de biofilme nos meios testados. Porém, todos os antimicrobianos foram capazes de erradicar o biofilme formado em mais de 50% dos isolados ambientais e, parte desses agentes, erradicou o biofilme dos isolados clínicos (≥ 50%). Não foi possível observar formação de biofilme por MEV utilizando lamínulas de vidro. Quanto ao perfil de hidrofobicidade, três isolados ambientais se mostram moderadamente hidrofóbicos e os demais hidrofílicos. Pela técnica ERIC-PCR não foi possível diferenciar os isolados diferenciar os isolados clínicos dos ambientais nem entre os isolados de um mesmo grupo. A resistência a tetraciclina pelos isolados, deve-se a mecanismos intrínsecos de resistência conforme dados da literatura. Já a multirresistência por isolados clínicos pode ser adquirida, uma vez que o ambiente hospitalar abriga diversos genes de resistência. Por outro lado, a expressiva formação de biofilme, sobretudo pelos isolados ambientais, indica um mecanismo de proteção em resposta ao ambiente impactado no qual vivem, independe da significativa erradicação de biofilme, pois esses isolados podem não está sob pressão seletiva direta a estes antimicrobianos. Neste estudo, os isolados se mostraram maioritariamente hidrofílicos com baixa capacidade de aderência em lamínulas de vidro, possivelmente, devido a forças repulsivas. Os diferentes perfis de resistência encontrados não garante a presença de clones bacterianos distintos entre os isolados investigados, uma vez que foi observado clonalidade entre os clínicos e ambientais. Entretanto, a presença de bactérias potencialmente produtoras de biofilme no riacho Cavouco é preocupante para a saúde pública.CAPESThe presence of resistant bacteria in the aquatic environment from humans and animals exposed to antimicrobials is one of the main problems of this ecosystem. The Cavouco stream is a tributary of the Capibaribe river, the main river of Pernambuco. This stream, during its course, receives a contribution of pollutant load of residues. Different bacterial species have been identified in this environment, such as Proteus mirabilis, which occurs in water, soil, human gastrointestinal tract and other animals. The present study aimed to characterize the genetically and biochemically isolates of P. mirabilis obtained from the Cavouco stream, in comparison to clinical isolates of the same species. Strain 767 (UFPEDA) was used as reference control. The identity of the isolates was confirmed by the MALDI-TOF-MS technique, which proved to be efficient with a high degree of compatibility with the P. mirabilis species. The susceptibility profile was performed in triplicate by means of the antibiogram, hydrophobicity profile by the hydrocarbon adherence method, biofilm formation in different media (LB, BHI and TSB) by the crystal violet method and SEM, besides the eradication of the biofilm by antimicrobials used in the antibiogram. The genetic diversity of the isolates was analyzed by ERIC-PRC. Two clinical isolates (ICP4, ICP5) were multiresistant, whereas the environmental isolates showed resistance only to tetracycline, except the CP525S isolate, which was also resistant to ampicillin. All the isolates had the capacity to biofilm in the media tested. However, all the antimicrobials were able to eradicate the biofilm formed in more than 50% of the environmental isolates and, part of these agents, eradicated the biofilm of the clinical isolates (≥ 50%). It was not possible to observe biofilm formation by MEV using glass coverslips. As for the hydrophobicity profile, three environmental isolates are moderately hydrophobic and the other hydrophilic ones. By the ERIC-PCR technique it was not possible to differentiate the isolates to differentiate the clinical isolates from the environmental isolates or from the same group. The resistance to tetracycline by the isolates is due to intrinsic mechanisms of resistance as reported in the literature. However, multiresistance by clinical isolates can be acquired, since the hospital environment hosts several resistance genes. On the other hand, the expressive biofilm formation, especially by environmental isolates, indicates a protective mechanism in response to the impacted environment in which they live, independent of the significant biofilm eradication, since these isolates may not be under direct selective pressure to these antimicrobials. In this study, the isolates showed to be mostly hydrophilic with low adhesion capacity in glass coverslips, possibly due to repulsive forces. The different resistance profiles found did not guarantee the presence of distinct bacterial clones among the investigated isolates, since clinical and environmental clonality was observed. However, the presence of potentially biofilm-producing bacteria in the Cavouco stream is a concern for public health.porUniversidade Federal de PernambucoPrograma de Pos Graduacao em Ciencias BiologicasUFPEBrasilAttribution-NonCommercial-NoDerivs 3.0 Brazilhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessBactérias gram-negativasBiofilmesRecife (PE)Caracterização bioquímica e genética de isolados de Proteus mirabilis provenientes do Riacho do Cavouco, Recife-PEinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesismestradoreponame:Repositório Institucional da UFPEinstname:Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)instacron:UFPETHUMBNAILDISSERTAÇÃO Sivoneide Maria da Silva.pdf.jpgDISSERTAÇÃO Sivoneide Maria da Silva.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1213https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/30484/5/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Sivoneide%20Maria%20da%20Silva.pdf.jpgdbeb7fe422372d16f0a44cf0787eb603MD55ORIGINALDISSERTAÇÃO Sivoneide Maria da Silva.pdfDISSERTAÇÃO Sivoneide Maria da Silva.pdfapplication/pdf1679742https://repositorio.ufpe.br/bitstream/123456789/30484/1/DISSERTA%c3%87%c3%83O%20Sivoneide%20Maria%20da%20Silva.pdf79b019a0631405b26a11be2f1cc0bd86MD51CC-LICENSElicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; 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