Avaliação do mecanismo de morte celular induzida pela lectina da peçonha de Bothrops leucurus (BIL): correlação com transição de permeabilidade mitocondrial

• Autor(a) principal: SOUZA, Mary Ângela Aranda de
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFPE
• Texto Completo: https://repositorio.ufpe.br/handle/123456789/29282
• topic: Cobra venenosa- veneno; Bothrops leucurus; Lectinas

As lectinas são proteínas ou glicoproteínas com a capacidade de aglutinar eritrócitos e outras células, precipitar polissacarídeos e outras glicoproteínas por possuírem um (ou mais) centro de ligação, específico e reversível, a carboidratos. BlL é uma lectina ligante de galactosídeo, e foi purificada do veneno da serpente Bothrops leucurus através da cromatografia de afinidade em gel de guar. A atividade antitumoral de BlL foi avaliada em relação ao seu potencial citotóxico em linhagem tumoral (K562, Hep-2 e NCI-H292) e quanto à sua capacidade hemolítica. BlL apresentou uma significante atividade citotóxica em todas as linhagens tumorais testadas e não exibiu atividade hemolítica na máxima concentração testada (2000 μg/mL). Além disso, foi realizada em células K562, a análise da externalização da fosfatidilserina e potencial de membrana mitocondrial, utilizando microscópio de fluorescência. Tratamento com BlL induziu externalização da fosfatidilserina e despolarização mitocondrial, indicando morte celular por apoptose. A diminuição significativa da viabilidade de células B16-F10 de melanoma após tratamento com BlL também foi observada. A morte celular foi provavelmente decorrente dos aumentos prévios nas concentrações de cálcio intracelular e de espécies reativas de oxigênio (EROs) mitocondrial. A incubação de células (10⁶/mL) na presença de BlL (75 μg/mL) e Ca²⁺ (20 μM) induziu diminuição da permeabilização de membrana plasmática induzida por digitonina (20 μM), seguida possivelmente por influxo da lectina que se acumulou preferencialmente na mitocôndria. Quando testada em mitocôndria de fígado de rato (MFR), a velocidade de consumo de oxigênio durante o estado 3, utilizando ADP como substrato respiratório, não apresentou redução significativa na presença de BlL (10 μg/mL). No entanto, BlL apresentou efeito estimulatório na respiração durante o estado 4, sendo a lectina responsável por um estímulo de 57,1%. Este estímulo do consumo de oxigênio no estado respiratório 4 se refletiu na redução do controle respiratório. A razão ADP/O em suspensões mitocondriais na condição controle e na presença de BlL foi de 2,5 ± 0,07 e 2,3 ± 0,04 (p<0,05), respectivamente, esta diferença indica uma perda da eficiência da fosforilação oxidativa de 8 %. Os parâmetros de potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm) também foram avaliados após incubação das suspensões mitocondriais com BlL. Houve significativa diminuição do ΔΨm, sensível a Ciclosporina A (CsA), e estímulo a abertura do poro de transição de permeabilidade mitocondrial (PTPM). Em conjunto, estes resultados indicam que o efeito citotóxico de BlL provavelmente está relacionado com o efeito de transição de permeabilidade mitocondrial (TPM).