Clonagem e expressão do gene da glicoproteína D do herpesvírus equídeo tipo 1 em Pichia pastoris e avaliação de sua imunogenicidade

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Rodrigues, Paulo Ricardo Centeno
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPel - Guaiaca
Texto Completo: http://guaiaca.ufpel.edu.br/handle/prefix/7989
Resumo: O herpesvírus equídeo 1 (EHV-1) apresenta distribuição mundial e causa graves prejuízos à equídeocultura e a cadeia produtiva desse agronegócio, como agente de surtos de doença respiratória, reprodutiva e neurológica, em animais jovens e adultos. A glicoproteína D do EHV-1 (gDEHV-1) é uma glicoproteína do envelope, essencial para a penetração do agente em células do hospedeiro e já demonstrou capacidade de induzir proteção contra esse agente em modelos murino e equino. Os objetivos deste trabalho foram: clonar, expressar e demonstrar a imunogenicidade da gDEHV-1 expressa em Pichia pastoris, em modelo murino. Para tanto, avaliou-se a resposta imune induzida por duas vacinas: uma formulada com a gDEHV-1 e outra com a gDEHV-1 associada ao EHV-1; frente a três vacinas: uma comercial, formulada com o EHV-1 associado ao EHV-4, outra experimental, formulada com EHV-1, e o controle, formulado com PBS. Em todas as vacinas o adjuvante utilizado foi hidróxido de alumínio a 10%. Os resultados encontrados permitem concluir que a glicoproteína D recombinante do EHV-1, expressa em P. pastoris, demonstrou sua antigenicidade e imunogenicidade. Além disso, conservou epítopos que permitiram sua identificação por anticorpos específicos anti-EHV-1 induzidos pelas vacinas, comercial e experimental, formuladas com vírus íntegro inativado. A vacina experimental contendo vírus íntegro (EHV-1) inativado acrescido da glicoproteína D recombinante do EHV-1 foi significativamente superior na indução de anticorpos específicos contra a gDEHV-1, no ELISA indireto, em comparação com as vacinas contendo vírus íntegro ou de subunidades do vírus.
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spelling 2021-09-24T21:17:32Z2021-09-232021-09-24T21:17:32Z2018-08-31RODRIGUES, Paulo Ricardo Centeno. Clonagem e expressão do gene da glicoproteína D do herpesvírus equídeo tipo 1 em Pichia pastoris e avaliação de sua imunogenicidade. 2018. 65f. Tese (Doutorado em Veterinária) - Faculdade de Veterinária, Universidade Federal de Pelotas, Pelotas, 2018.http://guaiaca.ufpel.edu.br/handle/prefix/7989O herpesvírus equídeo 1 (EHV-1) apresenta distribuição mundial e causa graves prejuízos à equídeocultura e a cadeia produtiva desse agronegócio, como agente de surtos de doença respiratória, reprodutiva e neurológica, em animais jovens e adultos. A glicoproteína D do EHV-1 (gDEHV-1) é uma glicoproteína do envelope, essencial para a penetração do agente em células do hospedeiro e já demonstrou capacidade de induzir proteção contra esse agente em modelos murino e equino. Os objetivos deste trabalho foram: clonar, expressar e demonstrar a imunogenicidade da gDEHV-1 expressa em Pichia pastoris, em modelo murino. Para tanto, avaliou-se a resposta imune induzida por duas vacinas: uma formulada com a gDEHV-1 e outra com a gDEHV-1 associada ao EHV-1; frente a três vacinas: uma comercial, formulada com o EHV-1 associado ao EHV-4, outra experimental, formulada com EHV-1, e o controle, formulado com PBS. Em todas as vacinas o adjuvante utilizado foi hidróxido de alumínio a 10%. Os resultados encontrados permitem concluir que a glicoproteína D recombinante do EHV-1, expressa em P. pastoris, demonstrou sua antigenicidade e imunogenicidade. Além disso, conservou epítopos que permitiram sua identificação por anticorpos específicos anti-EHV-1 induzidos pelas vacinas, comercial e experimental, formuladas com vírus íntegro inativado. A vacina experimental contendo vírus íntegro (EHV-1) inativado acrescido da glicoproteína D recombinante do EHV-1 foi significativamente superior na indução de anticorpos específicos contra a gDEHV-1, no ELISA indireto, em comparação com as vacinas contendo vírus íntegro ou de subunidades do vírus.Equine herpesvirus 1 (EHV-1) has a worldwide distribution and causes serious damage to the equidoculture and the productive chain of this agribusiness, as an agent of outbreaks of respiratory, reproductive and neurological disease, in young and adult animals. EHV-1 glycoprotein D (gDEHV-1) is an enveloped glycoprotein essential for the agent penetration into the host cells and has already demonstrated the ability to induce protection against this agent in murine and equine models. The objectives of this work were: to clone, express and demonstrate the immunogenicity of gDEHV-1 expressed in Pichia pastoris, in a murine model. For this, the immune response induced by two vaccines was evaluated: one formulated with gDEHV-1 and another with gDEHV-1 associated with EHV-1; compared to three vaccines: one commercial, formulated with EHV-1 associated with EHV-4, another experimental, formulated with EHV-1, and the control, formulated with PBS. In all vaccines the adjuvant used was 10% aluminum hydroxide. The results showed that recombinant D-glycoprotein EHV-1, expressed in P. pastoris, demonstrated its antigenicity and immunogenicity. Also, it conserved epitopes that allowed its identification by commercial and experimental vaccine-induced anti-EHV-1 specific antibodies formulated with inactivated whole virus. The experimental vaccine containing inactivated whole virus (EHV-1) plus the recombinant D-glycoprotein of EHV-1 was significantly superior in the induction of specific antibodies against gDEHV-1 in the indirect ELISA when compared to the vaccines containing whole virus or subunits of the virus.Sem bolsaporUniversidade Federal de PelotasPrograma de Pós-Graduação em VeterináriaUFPelBrasilFaculdade de VeterináriaCNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA::PATOLOGIA ANIMALRinopneumoniteEHV-1Abortamento viralVacinaçãoEquídeoculturaRhinopneumonitisViral abortionVaccinationEquidcultureClonagem e expressão do gene da glicoproteína D do herpesvírus equídeo tipo 1 em Pichia pastoris e avaliação de sua imunogenicidadeCloning and expression of the equine herpesvirus type 1 glycoprotein D gene in Pichia pastoris and evaluation of its immunogenicityinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesishttp://lattes.cnpq.br/5305087376881072http://lattes.cnpq.br/0198257253890399Lima, Marcelo dehttp://lattes.cnpq.br/1435610308662740Leite, Fabio Pereira LeivasRodrigues, Paulo Ricardo CentenoRODRIGUES, Paulo Ricardo Centeno. Clonagem e expressão do gene da glicoproteína D do herpesvírus equídeo tipo 1 em Pichia pastoris e avaliação de sua imunogenicidade. 2018. 65f. Tese (Doutorado em Veterinária) - Faculdade de Veterinária, Universidade Federal de Pelotas, Pelotas, 2018.info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFPel - Guaiacainstname:Universidade Federal de Pelotas (UFPEL)instacron:UFPELTEXTtese_paulo_ricardo_centeno_rodrigues.pdf.txttese_paulo_ricardo_centeno_rodrigues.pdf.txtExtracted texttext/plain118218http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/bitstream/prefix/7989/6/tese_paulo_ricardo_centeno_rodrigues.pdf.txt4a805336f661923e7a40668794cb6a79MD56open accessTHUMBNAILtese_paulo_ricardo_centeno_rodrigues.pdf.jpgtese_paulo_ricardo_centeno_rodrigues.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1245http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/bitstream/prefix/7989/7/tese_paulo_ricardo_centeno_rodrigues.pdf.jpg8f92686a0e1a40da745886fb1862dc5cMD57open accessORIGINALtese_paulo_ricardo_centeno_rodrigues.pdftese_paulo_ricardo_centeno_rodrigues.pdfapplication/pdf1501572http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/bitstream/prefix/7989/1/tese_paulo_ricardo_centeno_rodrigues.pdfefb18613db36593e513a548c90dd3a76MD51open accessCC-LICENSElicense_urllicense_urltext/plain; charset=utf-849http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/bitstream/prefix/7989/2/license_url4afdbb8c545fd630ea7db775da747b2fMD52open accesslicense_textlicense_texttext/html; charset=utf-80http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/bitstream/prefix/7989/3/license_textd41d8cd98f00b204e9800998ecf8427eMD53open accesslicense_rdflicense_rdfapplication/rdf+xml; charset=utf-80http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/bitstream/prefix/7989/4/license_rdfd41d8cd98f00b204e9800998ecf8427eMD54open accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81866http://guaiaca.ufpel.edu.br/xmlui/bitstream/prefix/7989/5/license.txt43cd690d6a359e86c1fe3d5b7cba0c9bMD55open accessprefix/79892023-07-17 20:42:51.014open accessoai:guaiaca.ufpel.edu.br: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ório InstitucionalPUBhttp://repositorio.ufpel.edu.br/oai/requestrippel@ufpel.edu.br || repositorio@ufpel.edu.br || aline.batista@ufpel.edu.bropendoar:2023-07-17T23:42:51Repositório Institucional da UFPel - Guaiaca - Universidade Federal de Pelotas (UFPEL)false
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