Fracionamento dos componentes bioativos do veneno de Bothrops cotiara

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Pessatti, Marcos Luiz
Data de Publicação: 1994
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/68437
Resumo: Orientadores: Profa. Dra. Madalena Baron, Prof. Dr. José Domingos Fontana
id UFPR_e5f46696ca0ad03f8dbb3e8540ceaa6f
oai_identifier_str oai:acervodigital.ufpr.br:1884/68437
network_acronym_str UFPR
network_name_str Repositório Institucional da UFPR
repository_id_str 308
spelling Pessatti, Marcos LuizBaron, Madalena, 1961-Fontana, José Domingos, 1944-Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica)2021-02-15T23:15:05Z2021-02-15T23:15:05Z1994https://hdl.handle.net/1884/68437Orientadores: Profa. Dra. Madalena Baron, Prof. Dr. José Domingos FontanaDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Curso de Pós-Graduação em BioquímicaInclui referências: p. 77-93Resumo: A composição de venenos de serpentes como sendo mistura complexa de enzimas e de compostos não enzimáticos, com diferentes atividades biológicas, foi confirmada para o veneno de Bothrops cotiara. Os efeitos locais decorrentes de um envenenamento por serpentes, como hemorragia e necrose estão, de alguma forma, relacionados com enzimas proteolíticas, as quais complementadas pelas L-aminoácido oxidases, determinam a degradação das proteínas e boa parte de seus monômeros. O veneno de Bothrops cotiara foi submetido a fracionamento por permeação em gel de Sephadex G-100 associada à cromatografia de troca iônica em DEAE-celulose. Como resultado destas técnicas de fracionamento, foram obtidas: a) nove frações hemorrágicas, sendo que dentre os componentes da fração de permeação de menor faixa de peso molecular (TH-3), o refracionamento por troca iônica permitiu recuperar na faixa de acidicidade média (TH-3b) a fração com maior atividade hemorrágica. O zinco (Zn2+) foi confirmado como cofator destas metalo-proteinases. b) oito frações proteolíticas sobre a caseína, sendo que o melhor fator de purificação (6.67) foi conseguido simplesmente por filtração em gel, na faixa mais elevada de peso molecular (PC-1). c) nove frações coagulantes "thrombin-like", sendo que as sub-frações de média acidicidade da troca iônica (AC-c e AC-e), derivadas inicialmente da população proteica de maior peso molecular da filtração em gel (AC-1), localizaram os componentes mais efetivos (IC = 41.7) bem superior portanto à aquela verificada para o veneno bruto (IC = 7.7). d) doze frações para L-aminoácido oxidase (LAO), por permeação em gel combinada com troca iônica, sendo que a sub-fração com a maior atividade encontrada, de pequeno conteúdo proteico (LAO-lc), foi mais sujeita a inativação enzimática se comparada com as demais. Uma maior resolução do conjunto de isoenzimas para LAO foi obtida com a metodologia de isoeletrofocalização em poliacrilamida (PAGE-IEF) acoplada ao zimograma, medido com L-metionina e L-leucina como substratos. Um perfil enzimático constituído de até 18 bandas para LAO sobre uma população proteica de 36 bandas foi, pioneiramente neste trabalho, encontrado no veneno de Bothrops cotiara. O FAD (flavina adenina dinucleotídeo) foi confirmado como coenzima do conjunto de LAOs. O perfil proteico complexo do veneno de Bothrops cotiara foi igualmente confirmado através de cromatografia líquida de alta resolução (HPLC) e por eletroforese capilar de alta resolução (CE).Abstract: The known complex of bioactive compounds comprising snake venoms was particularly examined in the Bothrops cotiara venom. Focus was set in the enzymatic activities closely related to the tissue damage following venom inoculation, such as hemorrhaging, proteases, and L-amino acid oxidases activities. The Bothrops cotiara venom was submitted to fractionation by gel-permeation in Sephadex G-100 and ion-exchange chromatography in DEAE-cellulose, and the results were: a) nine hemorrhagic fractions, the most active being found within the middle molecular weight (TH-3) and middle acidic charge protein subpopulation (TH-b). The zinc ion was confirmed as co-factor of these metalloproteinases. b) eight proteolytic fractions measured with casein, and among them, the highest purification factor (6.67) simply resulted from gel permeation as the component (s) of the highest molecular weight range (PC-1). c) nine thrombin-like fractions whose features displayed relatively high molecular weight (AC-1) and middle acidicity (AC-c and AC-d). The maximum enrichment obtained (CI=41.7) by far exceeded the basal activity of the crude venom (CI=7.7). d) twelve fractions for L-amino acid oxidases (LAO) resulted from combined gel permeation and ionic exchange. A remarkable resolution for the whole isoenzymes was obtained by polyacrylamide gel isoelectrofocusing (PAGE-IEF) coupled to LAO zymogram using L-methionine or L-leucine as substrates. This enzymatic profile, a pioneer research in Bothrops cotiara venom, consisted up to eighteen LAO bands amongst thirty six protein bands. FAD (flavin adenin dinucleotide) was confirmed as the enzymatic cofactor for LAO(s). The microheterogenity of Bothrops cotiara venom proteins was also assessed by high performance liquid chromatography (HPLC) and by high voltage capillary electrophoresis (CE).93 f. + anexos : il., grafs., tabs.application/pdfDisponível em formato digitalBioquímicaCobra venenosa - VenenoCiências (Bioquímica)Fracionamento dos componentes bioativos do veneno de Bothrops cotiarainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALT - MARCOS LUIZ PESSATTI.pdfapplication/pdf5993556https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/68437/1/T%20-%20MARCOS%20LUIZ%20PESSATTI.pdf2dc94fda4ce42eb74ce871083395701aMD51open access1884/684372021-02-15 20:15:05.971open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/68437Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082021-02-15T23:15:05Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
dc.title.pt_BR.fl_str_mv Fracionamento dos componentes bioativos do veneno de Bothrops cotiara
title Fracionamento dos componentes bioativos do veneno de Bothrops cotiara
spellingShingle Fracionamento dos componentes bioativos do veneno de Bothrops cotiara
Pessatti, Marcos Luiz
Bioquímica
Cobra venenosa - Veneno
Ciências (Bioquímica)
title_short Fracionamento dos componentes bioativos do veneno de Bothrops cotiara
title_full Fracionamento dos componentes bioativos do veneno de Bothrops cotiara
title_fullStr Fracionamento dos componentes bioativos do veneno de Bothrops cotiara
title_full_unstemmed Fracionamento dos componentes bioativos do veneno de Bothrops cotiara
title_sort Fracionamento dos componentes bioativos do veneno de Bothrops cotiara
author Pessatti, Marcos Luiz
author_facet Pessatti, Marcos Luiz
author_role author
dc.contributor.other.pt_BR.fl_str_mv Baron, Madalena, 1961-
Fontana, José Domingos, 1944-
Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciências (Bioquímica)
dc.contributor.author.fl_str_mv Pessatti, Marcos Luiz
dc.subject.por.fl_str_mv Bioquímica
Cobra venenosa - Veneno
Ciências (Bioquímica)
topic Bioquímica
Cobra venenosa - Veneno
Ciências (Bioquímica)
description Orientadores: Profa. Dra. Madalena Baron, Prof. Dr. José Domingos Fontana
publishDate 1994
dc.date.issued.fl_str_mv 1994
dc.date.accessioned.fl_str_mv 2021-02-15T23:15:05Z
dc.date.available.fl_str_mv 2021-02-15T23:15:05Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://hdl.handle.net/1884/68437
url https://hdl.handle.net/1884/68437
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.pt_BR.fl_str_mv Disponível em formato digital
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv 93 f. + anexos : il., grafs., tabs.
application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UFPR
instname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron:UFPR
instname_str Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron_str UFPR
institution UFPR
reponame_str Repositório Institucional da UFPR
collection Repositório Institucional da UFPR
bitstream.url.fl_str_mv https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/68437/1/T%20-%20MARCOS%20LUIZ%20PESSATTI.pdf
bitstream.checksum.fl_str_mv 2dc94fda4ce42eb74ce871083395701a
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1801860455184990208

Registros relacionados