Análise da formação e desenvolvimento de biofilmes em blocos de dentina humana

• Autor(a) principal: Só, Bruna Barcelos
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/217527
• topic: Biofilmes; Microbiology; Biofilm; Bacteria; In situ hybridization; Confocal microscopy

Micro-organismos e seus produtos são os principais agentes causadores de 3 patologias pulpares e periapicais. Esses micro-organismos podem estar dispostos 4 em biofilmes em infecções primárias ou secundárias do canal radicular. Por isso, é 5 de extrema importância para a endodontia estudar esses biofilmes. No entanto, 6 ainda há muita controvérsia na literatura sobre a metodologia de cultivo e incubação. 7 Portanto, o objetivo desse estudo é caracterizar biofilmes formados in situ seguido 8 de diferentes métodos de incubação e meio de cultura. Com isso, o objetivo é 9 também avaliar a influência do meio de cultura e do tempo de incubação na 10 formação de biofilmes in situ e desenvolvimento in vitro. Para esse estudo, foram 11 selecionados 5 voluntários de acordo com critérios de inclusão. A metodologia foi 12 separada em 2 fases e os mesmos 5 voluntários participaram de ambas. Uma placa 13 intra-oral foi confeccionada para cada voluntário. Em cada uma, foram fixados 4 14 blocos de dentina humana (2x2x2mm). Os voluntários utilizaram a placa durante 3 15 dias e então uma amostra de cada placa foi separada para a extração de DNA e 16 hibridização DNA-DNA (Checkerboard DNA-DNA Hybridization). As outras 3 17 amostras de cada voluntário foram incubadas em meio de cultura BHI e estufa 18 microbiológica (37º C). No período de 7, 14 e 21 dias, uma amostra de cada 19 voluntário era removida para extração de DNA e análise de hibridização. Outra 20 amostra foi avaliada quanto ao biovolume de biofilme e quanto a viabilidade das 21 células bacterianas, por meio de microscopia confocal a laser. Após a primeira fase, 22 houve um período de intervalo (wash-out) de 7 dias até a segunda fase. A mesma 23 metodologia foi realizada com diferença para as condições de incubação que, dessa 24 vez, foi meio de cultura FAB em jarra de anaerobiose. Os dados foram tabulados e 25 procedeu-se a análise estatística. Os resultados mostraram que houve maior 26 diversidade e quantidade de espécies para o meio FAB em jarra de anaerobiose em 27 comparação ao BHI. A análise imediata mostrou uma maior diversidade de espécies 28 e também maior carga microbiana tanto para o BHI quanto para o FAB. Análises de 29 agrupamento de Ward demostraram que amostras pertencentes ao mesmo 30 participante, mas em diferentes tipos de incubação, não são similares. As amostras 31 de um mesmo período de tempo, mas provenientes de diferentes voluntários 32 também não são similares. As amostras de BHI, de um modo geral, são mais 33 similares entre si do que as do FAB. O biofilme de FAB em 14 dias tem carga 34 microbiana significantemente maior que o período imediato e 7 dias nas mesmas 35 condições, e também foi significantemente maior que o mesmo período em BHI. A 36 carga microbiana das espécies selecionadas em BHI decresce ao longo do tempo, 37 no entanto, o biovolume permanece estatisticamente estável. É possível que haja 38 um crescimento de micro-organismos anaeróbios facultativos, os quais não tem uma 39 significante representatividade nas sondas de DNA selecionadas para esse estudo. 40 Pode-se concluir que há particularidades nos biofilmes formados mesmo em 41 mesmas condições de incubação ou de amostras provenientes de um mesmo 42 paciente. Além disso, não há uma metodologia ideal para a formação de biofilmes 43 pois depende do objetivo de cada estudo o qual definirá o tipo de biofilme que se 44 espera e, com isso, também sua metodologia