Microscopia confocal in vivo: estabelecimento da técnica de time lapse para a análise da captação de vesículas extracelulares liberadas por células tronco mesenquimais em cultura de células

• Autor(a) principal: Muszinski, Diego Amaral
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/233792
• topic: Células-tronco mesenquimais; Vesículas extracelulares; Time lapse; Confocal; Mesenchymal stem cells; Extracellular vesicles; In vivo

Introdução: durante décadas, a única solução para estudar o comportamento de certos componentes celulares, foi pelo isolamento por fracionamento e purificação. Ou ainda através da fixação da célula num momento fisiológico completo, para poder aplicar diferentes técnicas de estudo. No entanto, dessa forma não é possível observar de forma direta, como os componentes celulares interagem entre si, ou a interação célula-a-células. Atualmente é possível o estudo da “célula viva”, e isso está para revolucionar e alterar os conceitos clássicos da biologia celular a uma grande velocidade. Objetivo: o objetivo deste estudo foi estabelecer as condições ideais para o estudo da captação e internalização de vesículas extracelulares por diferentes linhagens celulares utilizando técnicas de microscopia confocal em tempo real (time lapse). Método: utilizamos a técnica time lapse através da microscopia confocal para analisar as interações de células com vesículas extracelulares coletadas de células-tronco mesenquimais. Resultados: após fazermos imagens estáticas (in vitro) comprovamos que as vesículas extracelulares são internalizadas e, a partir de então, estabelecemos as técnicas e parâmetros para observar esse movimento. A partir de 2 h de incubação com as VEs verificou-se a presença das mesmas na região perinuclear. Através de microscopia time lapse (in vivo) observamos que a captação das VEs é muito rápida e ocorre nos primeiros minutos de incubação. Conclusão: neste estudo mostramos que para a visualização de células in vivo é importante determinar as condições ideais de incubação, estabelecendo o tempo de exposição e a intensidade do laser, assim como a frequência da captura das imagens para minimizar ao máximo o dano celular e o desaparecimento da fluorescência. Com base nesse estudo podemos estabelecer os parâmetros para analisar as células em tempo real.