Isolamento de marcadores microssatélites para Petunia integrifolia subesp. depauperata (Solanaceae) e Passiflora ovalis (Passifloraceae)

• Autor(a) principal: Kriedt, Raquel Athayde
• Data de Publicação: 2009
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/18656
• topic: Marcador molecular; Petunia integrifolia; Passiflora ovalis

Marcadores microssatélites são regiões do DNA compostas de pequenos motivos de um a seis nucleotídeos repetidos in tandem. Esses marcadores co-dominantes são altamente polimórficos e amplamente utilizados em diversos tipos de estudos devido a sua eficiência em determinar diferenças entre grupos, entre eles, estudos de genética de populações e conservação. Também, esses marcadores são apropriados na investigação de questões relacionadas aos processos históricos ocorridos em ambientes naturais através da análise dos padrões filogeográficos das espécies que neles habitam. Entender esses processos é de extrema relevância para a conservação de ambientes que se encontram sob constante pressão antrópica, como a Planície Costeira e a Mata Atlântica. Com intuito de contribuir para o entendimento desses processos, as espécies Petunia integrifolia subsp. depauperata e Passiflora ovalis foram selecionadas por se distribuírem ao longo da Planície Costeira e da Mata Atlântica, respectivamente, estando ameaçadas pela fragmentação de seus ambientes. O objetivo geral desse projeto foi a obtenção de um conjunto de marcadores microssatélites para estas espécies, visando sua aplicação em estudos evolutivos. Assim, o DNA total foi extraído e digerido, seguido da ligação de adaptadores para amplificação por PCR com “primers” específicos. Os fragmentos contendo microssatélites foram selecionados e clonados em vetor “TOPO TA cloning”, inserido em células competentes. Foram selecionadas 384 colônias transformadas de P. integrifolia subsp. depauperata e 312 de P. ovalis. Os clones de ambas as bibliotecas foram amplificados e sequenciados com os “primers” do vetor, resultando em um total de 481 sequências, das quais 411 foram únicas. Como resultado, aproximadamente 90% das sequências únicas continha repetições, 50 delas com tamanho adequado de repetição e região flanqueadora disponível para desenho de “primers”. Treze conjuntos de “primers” foram desenhados e sintetizados para P. integrifolia subsp. depauperata e 12 para P. ovalis. Esses resultados são condizentes com os demais encontrados para outras espécies de ambas as famílias botânicas, obtidos através do mesmo método selecionado para a obtenção dos conjuntos de “primers” neste trabalho. O desenvolvimento desses marcadores auxiliará no melhor entendimento da dinâmica populacional destas espécies e no estabelecimento de estratégias que priorizem a conservação de grupos que melhor representam a história evolutiva das espécies, identificando populações com maior variabilidade genética.