Obtenção e purificação de L-asparaginase de Zymomonas mobilis produzida por Escherichia colirecombinante
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Data de Publicação: | 2019 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFRJ |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/11422/13581 |
Resumo: | A leucemia linfoblástica aguda (LLA) é um câncer do sistema linfático com uma incidência importante, sobretudo, na população infantil. A enzima L-asparaginase tem uma reconhecida efetividade na terapia deste câncer. O Brasil não possui uma forma de produção desta enzima para uso clínico. Atualmente, pacientes com a doença dependem da importação do medicamento para prosseguir com o tratamento. Encontrar uma forma de produção nacional da L-asparaginase é de vital importância para melhorar a viabilidade e eficiência do tratamento da LLA. Nesse cenário, o presente trabalho estuda as condições de extração e purificação da enzima codificada pelo gene da bactéria Zymomonas mobilis expressado por via recombinante em Escherichia coli. Os processos de ruptura celular por homogeneizador a alta pressão e purificação cromatográfica em duas etapas foram estudados. Determinou-se que as melhores condições de rompimento são 300 bar e 4 passes. O primeiro passo cromatográfico foi pela cromatografia de afinidade por íons imobilizados e apresentou-se um fator de purificação de 12,1 com recuperação de 88%. O segundo passo foi pela cromatografia de troca iônica, a qual obteve um fator de purificação de 3,5 e recuperação de 69,5%. O grau de pureza obtido faz possível os estudos em animais desta enzima nacional e iniciar os trabalhos para um escalonamento do processo. |
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Gonçalves, Vinícius de Limahttp://lattes.cnpq.br/8063337006860938http://lattes.cnpq.br/6303018194186680Ramón Hernández, José Angelhttp://lattes.cnpq.br/0736524204459528Ferraz, Helen ConceiçãoCoelho, Maria Alice ZarurAlves, Tito Lívio Moitinho2021-01-28T14:10:02Z2023-11-30T03:04:06Z2019-02http://hdl.handle.net/11422/13581A leucemia linfoblástica aguda (LLA) é um câncer do sistema linfático com uma incidência importante, sobretudo, na população infantil. A enzima L-asparaginase tem uma reconhecida efetividade na terapia deste câncer. O Brasil não possui uma forma de produção desta enzima para uso clínico. Atualmente, pacientes com a doença dependem da importação do medicamento para prosseguir com o tratamento. Encontrar uma forma de produção nacional da L-asparaginase é de vital importância para melhorar a viabilidade e eficiência do tratamento da LLA. Nesse cenário, o presente trabalho estuda as condições de extração e purificação da enzima codificada pelo gene da bactéria Zymomonas mobilis expressado por via recombinante em Escherichia coli. Os processos de ruptura celular por homogeneizador a alta pressão e purificação cromatográfica em duas etapas foram estudados. Determinou-se que as melhores condições de rompimento são 300 bar e 4 passes. O primeiro passo cromatográfico foi pela cromatografia de afinidade por íons imobilizados e apresentou-se um fator de purificação de 12,1 com recuperação de 88%. O segundo passo foi pela cromatografia de troca iônica, a qual obteve um fator de purificação de 3,5 e recuperação de 69,5%. O grau de pureza obtido faz possível os estudos em animais desta enzima nacional e iniciar os trabalhos para um escalonamento do processo.The acute lymphoblastic leukemia (ALL) is a cancer of the lymphatic system with an important incidence, especially, in child population. The enzyme L-asparaginase has a recognized effectiveness in the therapy of this cancer. The Brazil does not have a way to produce the enzyme to clinical use. Currently, patients with the disease depend on the importation of the medicine to continue the treatment. Finding a national way of producing L-asparaginase is of vital importance in improving the viability and efficiency of ALL treatment. In this scenario, the present work studiesthe extraction and purification conditions of the enzyme encoded by the recombinantly expressed Zymomonas mobilis bacterial gene in Escherichia coli. The cell rupture by high-pressure homogenization and two steps chromatography purification were studied. It was determined that the best cell rupture conditions are 300 bar and 4 passages. The first chromatography step was by immobilized ion affinity chromatography and presented a 12,1 purification factor with 88% recovery. The second step was by ion exchange chromatography, which obtained 3,5 recuperation factor and 69,5% recovery. The purity degree obtained makes possible the animal studies of this national enzyme and start the studies for a process escalation.Submitted by Natasha Valladão (natashasilvaa4@gmail.com) on 2021-01-28T14:10:02Z No. of bitstreams: 1 ViniciusDeLimaGoncalves-min.pdf: 1084125 bytes, checksum: 06fee46cb26e4f15481fc752a8c9fbb8 (MD5)Made available in DSpace on 2021-01-28T14:10:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ViniciusDeLimaGoncalves-min.pdf: 1084125 bytes, checksum: 06fee46cb26e4f15481fc752a8c9fbb8 (MD5) Previous issue date: 2019-02porUniversidade Federal do Rio de JaneiroPrograma de Pós-Graduação em Engenharia QuímicaUFRJBrasilInstituto Alberto Luiz Coimbra de Pós-Graduação e Pesquisa de EngenhariaCNPQ::ENGENHARIAS::ENGENHARIA QUIMICAPurificaçãoCromatografiaLeucemia linfoblástica agudaObtenção e purificação de L-asparaginase de Zymomonas mobilis produzida por Escherichia colirecombinanteObtainment and purification of L-asparaginase from Zymomonas mobilis produced from recombinant Escherichia coliinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisabertoinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFRJinstname:Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ)instacron:UFRJORIGINALViniciusDeLimaGoncalves-min.pdfViniciusDeLimaGoncalves-min.pdfapplication/pdf1084125http://pantheon.ufrj.br:80/bitstream/11422/13581/1/ViniciusDeLimaGoncalves-min.pdf06fee46cb26e4f15481fc752a8c9fbb8MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81853http://pantheon.ufrj.br:80/bitstream/11422/13581/2/license.txtdd32849f2bfb22da963c3aac6e26e255MD5211422/135812023-11-30 00:04:06.821oai:pantheon.ufrj.br:11422/13581TElDRU7Dh0EgTsODTy1FWENMVVNJVkEgREUgRElTVFJJQlVJw4fDg08KCkFvIGFzc2luYXIgZSBlbnRyZWdhciBlc3RhIGxpY2Vuw6dhLCB2b2PDqihzKSBvKHMpIGF1dG9yKGVzKSBvdSBwcm9wcmlldMOhcmlvKHMpIGRvcyBkaXJlaXRvcyBhdXRvcmFpcyBjb25jZWRlKG0pIGFvIFJlcG9zaXTDs3JpbyBQYW50aGVvbiBkYSBVbml2ZXJzaWRhZGUgRmVkZXJhbCBkbyBSaW8gZGUgSmFuZWlybyAoVUZSSikgbyBkaXJlaXRvIG7Do28gLSBleGNsdXNpdm8gZGUgcmVwcm9kdXppciwgY29udmVydGVyIChjb21vIGRlZmluaWRvIGFiYWl4byksIGUvb3UgZGlzdHJpYnVpciBvIGRvY3VtZW50byBlbnRyZWd1ZSAoaW5jbHVpbmRvIG8gcmVzdW1vKSBlbSB0b2RvIG8gbXVuZG8sIGVtIGZvcm1hdG8gZWxldHLDtG5pY28gZSBlbSBxdWFscXVlciBtZWlvLCBpbmNsdWluZG8sIG1hcyBuw6NvIGxpbWl0YWRvIGEgw6F1ZGlvIGUvb3UgdsOtZGVvLgoKVm9jw6ogY29uY29yZGEgcXVlIGEgVUZSSiBwb2RlLCBzZW0gYWx0ZXJhciBvIGNvbnRlw7pkbywgdHJhZHV6aXIgYSBhcHJlc2VudGHDp8OjbyBkZSBxdWFscXVlciBtZWlvIG91IGZvcm1hdG8gY29tIGEgZmluYWxpZGFkZSBkZSBwcmVzZXJ2YcOnw6NvLgoKVm9jw6ogdGFtYsOpbSBjb25jb3JkYSBxdWUgYSBVRlJKIHBvZGUgbWFudGVyIG1haXMgZGUgdW1hIGPDs3BpYSBkZXNzYSBzdWJtaXNzw6NvIHBhcmEgZmlucyBkZSBzZWd1cmFuw6dhLCBiYWNrLXVwIGUgcHJlc2VydmHDp8OjbyBkaWdpdGFsLgoKRGVjbGFyYSBxdWUgbyBkb2N1bWVudG8gZW50cmVndWUgw6kgc2V1IHRyYWJhbGhvIG9yaWdpbmFsLCBlIHF1ZSB2b2PDqiB0ZW0gbyBkaXJlaXRvIGRlIGNvbmNlZGVyIG9zIGRpcmVpdG9zIGNvbnRpZG9zIG5lc3RhIGxpY2Vuw6dhLiBWb2PDqiB0YW1iw6ltIGRlY2xhcmEgcXVlIGEgc3VhIGFwcmVzZW50YcOnw6NvLCBjb20gbyBtZWxob3IgZGUgc2V1cyBjb25oZWNpbWVudG9zLCBuw6NvIGluZnJpbmdpIGRpcmVpdG9zIGF1dG9yYWlzIGRlIHRlcmNlaXJvcy4KClNlIG8gZG9jdW1lbnRvIGVudHJlZ3VlIGNvbnTDqW0gbWF0ZXJpYWwgZG8gcXVhbCB2b2PDqiBuw6NvIHRlbSBkaXJlaXRvcyBkZSBhdXRvciwgZGVjbGFyYSBxdWUgb2J0ZXZlIGEgcGVybWlzc8OjbyBpcnJlc3RyaXRhIGRvIGRldGVudG9yIGRvcyBkaXJlaXRvcyBhdXRvcmFpcyBlIGNvbmNlZGUgYSBVRlJKIG9zIGRpcmVpdG9zIHJlcXVlcmlkb3MgcG9yIGVzdGEgbGljZW7Dp2EsIGUgcXVlIGVzc2UgbWF0ZXJpYWwgZGUgcHJvcHJpZWRhZGUgZGUgdGVyY2Vpcm9zIGVzdMOhIGNsYXJhbWVudGUgaWRlbnRpZmljYWRvIGUgcmVjb25oZWNpZG8gbm8gdGV4dG8gb3UgY29udGXDumRvIGRhIHN1Ym1pc3PDo28uCgpTZSBvIGRvY3VtZW50byBlbnRyZWd1ZSDDqSBiYXNlYWRvIGVtIHRyYWJhbGhvIHF1ZSBmb2ksIG91IHRlbSBzaWRvIHBhdHJvY2luYWRvIG91IGFwb2lhZG8gcG9yIHVtYSBhZ8OqbmNpYSBvdSBvdXRybyhzKSBvcmdhbmlzbW8ocykgcXVlIG7Do28gYSBVRlJKLCB2b2PDqiBkZWNsYXJhIHF1ZSBjdW1wcml1IHF1YWxxdWVyIGRpcmVpdG8gZGUgUkVWSVPDg08gb3UgZGUgb3V0cmFzIG9icmlnYcOnw7VlcyByZXF1ZXJpZGFzIHBvciBjb250cmF0byBvdSBhY29yZG8uCgpBIFVGUkogaXLDoSBpZGVudGlmaWNhciBjbGFyYW1lbnRlIG8ocykgc2V1KHMpIG5vbWUocykgY29tbyBhdXRvcihlcykgb3UgcHJvcHJpZXTDoXJpbyhzKSBkYSBzdWJtaXNzw6NvLCBlIG7Do28gZmFyw6EgcXVhbHF1ZXIgYWx0ZXJhw6fDo28sIHBhcmEgYWzDqW0gZGFzIHBlcm1pdGlkYXMgcG9yIGVzdGEgbGljZW7Dp2EsIG5vIGF0byBkZSBzdWJtaXNzw6NvLgo=Repositório de PublicaçõesPUBhttp://www.pantheon.ufrj.br/oai/requestopendoar:2023-11-30T03:04:06Repositório Institucional da UFRJ - Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ)false |
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